小鼠哮喘模型肺組織中stat1活性變化及其對icam1表達的影響論文

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1、小鼠哮喘模型肺組織中STAT1活性變化及其對ICAM1表達的影響論文【摘要】目的探討信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子1（signaltransducersandactivatorsoftranscription1,STAT1）DNA結(jié)合活性在小鼠哮喘模型的肺組織中不同時間點的變化及其對細胞間黏附分子1（intercellularadhesionmolecule1,ICAM1）表達的調(diào)控作用。方法用雞卵白蛋白(OVA)抗原溶液腹腔注射致敏,霧化吸入激發(fā)制備哮喘小鼠模型，造模后凝膠遷移滯留試驗（EMSA）的方法測定病變肺組織中STAT1DNA結(jié)合活性在模型組不同時間點(8h、24h、48h、96h、7

2、d)的變化；PCR法測定ICAM1mRNA在上述時間點的表達，設(shè)生理鹽水對照組。設(shè)生理鹽水對照組為0h時間組。結(jié)果造模后肺STAT1明顯活化，96h達到最高峰；ICAM1mRNA與蛋白表達在8h開始有所增加，96h達高峰。STAT1DNA結(jié)合活性及ICAM1表達呈高度正相關(guān)。對照組則無明顯改變。結(jié)論哮喘模型的病變肺組織STAT1DNA結(jié)合活性的持續(xù)與異常升高，STAT1參與雞卵白蛋白誘導(dǎo)的小鼠哮喘的發(fā)生和發(fā)展；ICAM1在模型的不同時間點表達增加，可能受到STAT1調(diào)控。【關(guān)鍵詞】小鼠雞卵白蛋白哮喘動物模型轉(zhuǎn)錄黏附分子Abstract:ObjectiveTodetectthechang

3、eofDNAbindingactivityofSTAT1invarioustimeandexpressionofintercellularadhesionmolecule1icemodelobilityshiftassay(EMSA)andPCR.MethodsMiceizedintodifferentgroups:asthmagroupandnormalcontrolgroup.Miceinmodelgroupalsin.Themodelsobilityshiftassays(EMSA)atvarioustimepoints.ExpressionofICAM1iccurveinexpe

4、rimentalgroups.Itbegantoincreaseat8hpointtimeandreachedtopeakat96h,.freelRNAsignificantlyelevatedat8handthepeakportantfactorthatmaybeinvolvedinacuteandchronicinflammationdevelopment.STAT1alsoregulatedICAM1expressionduringasthma.Keyice;OVA;asthma;animalmodel;transcription;intercellularadhesionmolecu

5、le支氣管哮喘(bronchialasthma,BA)是一種氣道非特異性炎癥性疾病,在我國發(fā)病率比較高，嚴重影響患者的身心健康和生活質(zhì)量.freelg氫氧化鋁〔混合于0.15mL磷酸鹽緩沖液(PBS)中〕；第8天注射10μgOVA和1mg氫氧化鋁。第15天開始將小鼠置于封閉容器中，給予5%OVA和0.5×PBS霧化吸入激發(fā)哮喘發(fā)作；均每日1次，每次25min，連續(xù)7d；造模成功后，按上述時間點處死動物。標本處理：造模后放血處死小鼠，從每時間點組迅速取出肺組織，小部分作HE病理分析，其余部分液氮-70℃冷凍保存留待EMSA分析STAT1，RTPCR分析ICAM1mRNA表達。1.1.2凝膠遷

6、移滯留試驗（EMSA）檢測肺組織STAT1核蛋白的提取從液氮中取出肺組織，隔鋁箔紙搗碎。裂解緩沖A液（10mmol/LHEPESKOH，1.5mol/LMgCl2，10mmol/LKCl，1mmol/LPMSF，1mmol/LDTT10μg/mLLeupeptin，35μg/mLAprotinin）312μL溶解粉末，0℃勻漿10～20次。0℃，2000r/min，離心15s。棄沉淀，保留上清液冰浴5min。0℃，5000r/min，離心10s。保留沉淀用裂解緩沖B液（20mmol/LHEPESKOH，25%Glycerol，420mmol/LNaCl，1.5mmol/LMgCl2，1mm

7、ol/LPMSF，1mmol/LDTT，10μg/mLLeupeptin，35μg/mLPepstatin，10μg/mLAprotinin）104μL重懸，冰浴2min。0℃，12000g，離心15min。保留上清液，取1μL用考馬斯亮藍染色法測定核蛋白濃度。其余上清液分裝，-70℃保存?zhèn)溆?。凝膠遷移率變動電泳分析法（EMSA）具體步驟