小鼠哮喘模型肺組織中stat1活性變化及其對(duì)ic

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1、小鼠哮喘模型肺組織中STAT1活性變化及其對(duì)IC【摘要】目的探討信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子1（signaltransducersandactivatorsoftranscription1,STAT1）DNA結(jié)合活性在小鼠哮喘模型的肺組織中不同時(shí)間點(diǎn)的變化及其對(duì)細(xì)胞間黏附分子1（intercellularadhesionmolecule1,ICAM1）表達(dá)的調(diào)控作用。方法用雞卵白蛋白(OVA)抗原溶液腹腔注射致敏,霧化吸入激發(fā)制備哮喘小鼠模型，造模后凝膠遷移滯留試驗(yàn)（EMSA）的方法測(cè)定病變肺組織中STAT1DNA結(jié)合活性在模型組不同時(shí)間點(diǎn)(8

2、h、24h、48h、96h、7d)的變化；PCR法測(cè)定ICAM1mRNA在上述時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)，設(shè)生理鹽水對(duì)照組。設(shè)生理鹽水對(duì)照組為0h時(shí)間組。結(jié)果造模后肺STAT1明顯活化，96h達(dá)到最高峰；ICAM1mRNA與蛋白表達(dá)在8h開始有所增加，96h達(dá)高峰。STAT1DNA結(jié)合活性及ICAM1表達(dá)呈高度正相關(guān)。對(duì)照組則無明顯改變。結(jié)論哮喘模型的病變肺組織STAT1DNA結(jié)合活性的持續(xù)與異常升高，STAT1參與雞卵白蛋白誘導(dǎo)的小鼠哮喘的發(fā)生和發(fā)展；ICAM1在模型的不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)增加，可能受到STAT1調(diào)控。【關(guān)鍵詞】小鼠雞卵白蛋白哮喘動(dòng)物模

3、型轉(zhuǎn)錄黏附分子　　Abstract:ObjectiveTodetectthechangeofDNAbindingactivityofSTAT1invarioustimeandexpressionofintercellularadhesionmolecule1icemodelobilityshiftassay(EMSA)andPCR.MethodsMiceizedintodifferentgroups:asthmagroupandnormalcontrolgroup.Miceinmodelgroupalsin.Themodelsobilit

4、yshiftassays(EMSA)atvarioustimepoints.ExpressionofICAM1iccurveinexperimentalgroups.Itbegantoincreaseat8hpointtimeandreachedtopeakat96h,thendecreasedbutstillkeepobviouslyhigherat7dversuscontrolgroup(P<0.01).LevelsofICAM1mRNAsignificantlyelevatedat8handthepeakportantfact

5、orthatmaybeinvolvedinacuteandchronicinflammationdevelopment.STAT1alsoregulatedICAM1expressionduringasthma.　　Keyice;OVA;asthma;animalmodel;transcription;intercellularadhesionmolecule　　支氣管哮喘(bronchialasthma,BA)是一種氣道非特異性炎癥性疾病,在我國(guó)發(fā)病率比較高，嚴(yán)重影響患者的身心健康和生活質(zhì)量，給社會(huì)及家庭造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。隨著研究的深

6、入，細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)哮喘的作用越來越受重視，特別是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子1（signaltransducersandactivatorsoftranscription1,STAT1），成為揭示哮喘發(fā)病機(jī)制的一個(gè)新的途徑。STAT1是連接多種細(xì)胞膜受體與選擇性效應(yīng)器之間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要蛋白質(zhì)，在細(xì)胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中起著重要作用。本文旨在通過建立小鼠的哮喘模型，研究STAT1在哮喘發(fā)病過程中對(duì)ICAM1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，有助于從基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的水平尋找哮喘治療的新靶點(diǎn)。　　1材料與方法　　1．1實(shí)驗(yàn)方法　　1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組36只6周BALA/

7、C小鼠，購(gòu)自廣東醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，體質(zhì)量10～14g，合格證號(hào)：2005A025。按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)隨機(jī)分為6組：生理鹽水組（6只），模型組(造模后8h,24h,48h,96h,7d5個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死，各6只)。實(shí)驗(yàn)方法：第1日每只小鼠腹腔注射20μg卵白蛋白(OVA)和2mg氫氧化鋁〔混合于0.15mL磷酸鹽緩沖液(PBS)中〕；第8天注射10μgOVA和1mg氫氧化鋁。第15天開始將小鼠置于封閉容器中，給予5%OVA和0.5×PBS霧化吸入激發(fā)哮喘發(fā)作；均每日1次，每次25min，連續(xù)7d；造模成功后，按上述時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物。標(biāo)本處理：造模后放血

8、處死小鼠，從每時(shí)間點(diǎn)組迅速取出肺組織，小部分作HE病理分析，其余部分液氮-70℃冷凍保存留待EMSA分析STAT1，RTPCR分析ICAM1mRNA表達(dá)?！　?