合浦珠母貝c型凝集素2的序列特征和表達(dá)分析

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1、合浦珠母貝c型凝集素2的序列特征和表達(dá)分析摘要:構(gòu)建了合浦珠母貝的cDNA文庫(kù),并通過EST序列篩選和重新測(cè)序獲得了一個(gè)新的C型凝集素基因的cDNA序列,命名為PoLEC2,其長(zhǎng)度為1659bP,5’端非編碼區(qū)為39bp,3'端非編碼區(qū)為45bp,開放閱讀框?yàn)?575bp,可編碼524個(gè)氨基酸;PoLEC2蛋白的分子量約58.0kD,等電點(diǎn)為5.2;P0LEC2蛋白包含一個(gè)信號(hào)肽序列、一個(gè)MAM-2結(jié)構(gòu)域和一個(gè)C型凝集素的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域。同源性分析結(jié)果表明,PoLEC2與其他物種C型凝集素的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域序列的同源

2、性在26.5%?33.6%,相似性在45?1%?55.6%。組織表達(dá)分析表明,PoLEC2基因在肝胰臟、鰓、外套膜、性腺及腸組織中均有表達(dá),經(jīng)溶藻弧菌刺激后8h在腸組織中的表達(dá)量顯著上調(diào)。關(guān)鍵詞:合浦珠母貝;C型凝集素;序列特征;表達(dá)分析中圖分類號(hào):S917.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0439—811419—4026-05SequenceandExpressionAnalysisofaNovelC—typeLectinGenefromPearl0ysterPinctadafucataHUYu-tingl,2,Z

3、HANGDian—changl,JIANGian—fengl,CUI0Hua—yangl,2,ng1Shi—guil,SUTShu-gel,3,GUCHENMing-qiaAbstract:ThecDNAlibrarywasconstructedfromthepearloyster.AC—typelectingene,namedasPoLEC2,wasobtainedbyscreeningandsequencingusingESTsequences.ThelengthofPoLEC2cDNAsequencewa

4、s1659bp.SequenceanalysisshowedthattheopenreadingframeofPoLEC2genewas1575bp.The5’-UTR1engthwas39bpand3’-UTRlengthwas45bp.ThePoLEC2geneencodedaproteincontaining524aminoacids,andthepredictedmolecularweightofPoLEC2proteinwasabout58.0kDwiththeisoelectricpointof5.

5、2.TheproteinsequenceofPoLEC2genecontainedasignalpeptidesequeneewith16aminoacids,aMAM—2domainandacarbohydraterecognitiondomainofC—typelectin.SequenceanalysisshowedthattheidentityandsimilarityofthecarbohydraterecognitiondomainofPoLEC2genesbetweentheP.fucataand

6、otherorganismswere26.5%?33.6%and45.1%?55.6%respectively.TissueexpressionanalysisshowedthatthePoLEC2genewasexpressedinalltissuesofP.fucata,andtherewasmaximumexpressionintheintestineafter8hoursofthebacterialinfection.Keywords:Pinctadafucata;C—typelectin;sequen

7、cefeatures;expressionanalysisc型凝集素為一類鈣離子依賴活性的糖蛋白,具有至少一個(gè)糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域,能夠識(shí)別和結(jié)合細(xì)胞膜表面的糖基,其結(jié)合糖基具有專一性,即一種凝集素只能結(jié)合一種糖基[1,2]。C型凝集素是一種模式識(shí)別受體蛋白,主要有Man型配體和Ga1型配體,Man型配體與D—甘露糖、D—葡萄糖結(jié)合,Gal型配體與D—半乳糖及其衍生物結(jié)合[2]。PRR蛋白能識(shí)別病原微生物引起宿主的免疫應(yīng)答,在無脊椎動(dòng)物免疫防御中發(fā)揮著重要作用[1,2]。合浦珠母貝又稱馬氏珠母貝,是我國(guó)海水珍珠的主要種

8、類,由其所產(chǎn)的珍珠即為舉世聞名的“南珠”。近年來,由于養(yǎng)殖技術(shù)落后、養(yǎng)殖環(huán)境污染和種質(zhì)退化,致使養(yǎng)殖合浦珠母貝出現(xiàn)了生長(zhǎng)緩慢、病害頻發(fā)及死亡率高等現(xiàn)象[3],嚴(yán)重影響了合浦珠母貝養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。因此,必須加強(qiáng)合浦珠母貝免疫防御分子機(jī)制的研宄,為其免疫防治策略的制定提供理論依據(jù)。目前在櫛孔扇貝、海灣扇貝及長(zhǎng)牡蠣等[4一8]軟體動(dòng)物中初步開展了免疫防御分子機(jī)制的研宄,發(fā)現(xiàn)在扇貝中存在多種C型

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