合浦珠母貝C型凝集素2的序列特征和表達(dá)分析.doc

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1、合浦珠母貝C型凝集素2的序列特征和表達(dá)分析　　摘要：構(gòu)建了合浦珠母貝的ｃＤＮＡ文庫，并通過ＥＳＴ序列篩選和重新測(cè)序獲得了一個(gè)新的Ｃ型凝集素基因的ｃＤＮＡ序列，命名為ＰｏＬＥＣ２，其長(zhǎng)度為１６５９ｂｐ，５’端非編碼區(qū)為３９ｂｐ，３’端非編碼區(qū)為４５ｂｐ，開放閱讀框?yàn)椋保担罚担猓?，可編碼５２4個(gè)氨基酸；ＰｏＬＥＣ２蛋白的分子量約５８．０ｋＤ，等電點(diǎn)為５．２；ＰｏＬＥＣ２蛋白包含一個(gè)信號(hào)肽序列、一個(gè)ＭＡＭ－２結(jié)構(gòu)域和一個(gè)Ｃ型凝集素的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域。同源性分析結(jié)果表明，ＰｏＬＥＣ２與其他物種Ｃ型凝集素的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域序列的同源性在２６．５％～３３

2、．６％，相似性在４５．１％～５５．６％。組織表達(dá)分析表明，ＰｏＬＥＣ２基因在肝胰臟、鰓、外套膜、性腺及腸組織中均有表達(dá)，經(jīng)溶藻弧菌刺激后８ｈ在腸組織中的表達(dá)量顯著上調(diào)?！　￡P(guān)鍵詞：合浦珠母貝；Ｃ型凝集素；序列特征；表達(dá)分析　　中圖分類號(hào)：Ｓ９１７．４文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８11419－4026-05　　　?。樱澹瘢酰澹睿悖澹幔睿洌牛穑颍澹螅螅椋铮睿粒睿幔欤螅椋螅铮妫幔危铮觯澹欤茫簦穑澹蹋澹悖簦椋睿牵澹睿澹妫颍铮恚校澹幔颍欤希螅簦澹颍校椋睿悖簦幔洌醘ucata　　　　ＨＵＹｕ－ｔｉｎｇ１，２，ＺＨＡＮＧＤｉａｎ－ｃ

3、ｈａｎｇ１，ＪＩＡＮＧＳｈｉ－ｇｕｉ１，ＳＵＴｉａｎ－ｆｅｎｇ１，ＣＵＩＳｈｕ－ｇｅ１，３，ＧＵＯＨｕａ－ｙａｎｇ１，２，ＣＨＥＮＭｉｎｇ－ｑｉａｎｇ１　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｐｅａｒｌｏｙｓｔｅｒ．ＡＣ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎｇｅｎｅ，ｎａｍｅｄａｓＰｏＬＥＣ２，ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇusingＥＳＴｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆＰｏＬＥＣ２ｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓ１６５９ｂｐ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ

4、ａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｏｆＰｏＬＥＣ２ｇｅｎｅｗａｓ１５７５ｂｐ．Ｔｈｅ５’-ＵＴＲｌｅｎｇｔｈｗａｓ３９ｂｐａｎｄ３’-ＵＴＲｌｅｎｇｔｈｗａｓ４５ｂｐ．ＴｈｅＰｏＬＥＣ２ｇｅｎｅｅｎｃｏｄｅｄａｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ５２4ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ａｎｄｔｈｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆＰｏＬＥＣ２ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓａｂｏｕｔ５８．０ｋＤｗｉｔｈｔｈｅｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｏｉｎｔｏｆ５．２．ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰｏＬＥＣ２

5、ｇｅｎｅｃｏｎｔａｉｎｅｄａｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｗｉｔｈ１６ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ａＭＡＭ－２ｄｏｍａｉｎａｎｄａｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｏｆＣ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ．ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｄｅｎｔｉｔｙａｎｄｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｏｆｔｈｅｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｏｆＰｏＬＥＣ２ｇｅｎｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＰ．fucataａｎｄｏｔｈｅｒｏｒｇａｎｉｓｍｓwere２６．５％~３３．６％ａｎｄ４５．１％~５５

6、．６％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｉｓｓｕｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＰｏＬＥＣ２ｇｅｎｅｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｌｌｔｉｓｓｕｅsｏｆＰ．fucata，ａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｍａｘｉｍｕｍｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎｅａｆｔｅｒ８ｈｏｕｒｓｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｉｎｃｔａｄａfucata；Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ；ｓｅｑｕｅｎｃｅｆｅａｔｕｒｅｓ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ　　　?。眯湍貫橐活愨}離子依賴活性的糖

7、蛋白，具有至少一個(gè)糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域，能夠識(shí)別和結(jié)合細(xì)胞膜表面的糖基，其結(jié)合糖基具有專一性，即一種凝集素只能結(jié)合一種糖基［１，２］。Ｃ型凝集素是一種模式識(shí)別受體蛋白，主要有Ｍａｎ型配體和Ｇａｌ型配體，Man型配體與Ｄ－甘露糖、Ｄ－葡萄糖結(jié)合，Gal型配體與Ｄ－半乳糖及其衍生物結(jié)合［２］。ＰＲＲ蛋白能識(shí)別病原微生物引起宿主的免疫應(yīng)答，在無脊椎動(dòng)物免疫防御中發(fā)揮著重要作用［１，２］?！　『掀种槟肛愑址Q馬氏珠母貝，是我國(guó)海水珍珠的主要種類，由其所產(chǎn)的珍珠即為舉世聞名的“南珠”。近年來，由于養(yǎng)殖技術(shù)落后、養(yǎng)殖環(huán)境污染和種質(zhì)退化，致使養(yǎng)殖合浦珠母貝出

8、現(xiàn)了生長(zhǎng)緩慢、病害頻發(fā)及死亡率高等現(xiàn)象［３］，嚴(yán)重影響了合浦珠母貝養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。因此，必須加強(qiáng)合浦珠母貝免疫防御分子機(jī)制的研究，為其免疫防治策略的制定提供理論依據(jù)。目前在櫛孔扇貝、海灣扇貝及長(zhǎng)牡蠣等［４－８］軟體動(dòng)物中初