三種檢測(cè)牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留方法的比較研究論文

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1、摘要本論文主要是針對(duì)我國牛奶中存在抗生素殘留,且檢測(cè)體系不夠完善的現(xiàn)象,建立了牛奶中氟喹諾酮類藥物殘留檢測(cè)的高效液相色譜法、微生物法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法,并對(duì)其進(jìn)行了比較性研究,確定了不同檢測(cè)方法的適用范圍,以便為不同規(guī)模的乳品企業(yè)以及質(zhì)量監(jiān)督部門提供理論依據(jù)和技術(shù)參考。l建立了牛奶中恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星三組份殘留檢測(cè)的高效液相色譜法。樣品經(jīng)磷酸鹽緩沖液提取,過固相萃取柱凈化,洗脫,洗脫液經(jīng)微孔濾膜過濾,采用熒光檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星在0.005"--0.5Ilg/mE濃

2、度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.9997,---,0.9998:最低檢測(cè)限為0.005ug/IIlL,在添加濃度為0.050llg/mE、0.100pg/mE、0.200pg/mE時(shí)的平均回收率水平分布在71.5%~83.8%,CV均低于lo%,符合殘留檢測(cè)要求。2建立了牛奶中恩諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星三組份殘留檢測(cè)的微生物法一杯碟法,以枯草芽孢桿菌、藤黃微球菌和短小芽孢桿菌為工作菌。根據(jù)一劑量法設(shè)計(jì)原理,通過檢測(cè)三種藥物在磷酸鹽緩沖液中的最低檢測(cè)限和在牛奶中的最低檢測(cè)限,以及回收率的大小,確定了檢

3、測(cè)三種藥物的最適工作菌為枯草芽孢桿菌。結(jié)果表明:對(duì)于三種藥物,枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、藤黃微球菌的最適菌層濃度分別為O.8%、O.1%、0.5%:三種藥物在磷酸鹽緩沖液中的最低檢測(cè)限分布在0.025---0.5ug/nlL:在牛奶中的最低檢測(cè)限分布在0.03"--0.6Ilg/mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)都大于0.98,平均回收率分布在63.2~81.0%,精密度良好,CV均小于10%,能夠滿足殘留檢測(cè)要求。3建立了牛奶中思諾沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星三組份殘留檢測(cè)的酶聯(lián)免疫吸附法.利用美國Beac

4、on公司研制的試劑盒,原理是間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法。牛奶樣品經(jīng)二氯甲烷提取、離心后,取下層液體用氮?dú)獯蹈?,進(jìn)行測(cè)試。最后,在450hm處測(cè)量吸光度值,吸光度值與樣品中的氟喹諾酮藥物濃度成反比。結(jié)果表明:該試劑盒用來檢測(cè)牛奶中氟喹諾酮類藥物完全可靠,最低檢出限能達(dá)到0.002Ilg/mE,回收率在60"--70%之間,Cy小于10%。4綜合三種檢測(cè)方法的特異性、批量檢驗(yàn)的速度、檢驗(yàn)成本等比較看,高效液相法適合對(duì)樣品的準(zhǔn)確定性和定量:微生物法適合對(duì)大量樣品的篩選和定量,不能定性;酶聯(lián)免疫吸附法適合對(duì)大量樣品進(jìn)行快

5、速篩選。關(guān)鍵詞:牛奶;氟喹諾酮:殘留;檢測(cè);液相法;微生物法:酶聯(lián)免疫法ComparativeStudyOnThreeDetectionMethodsofFQsResiduesinMiⅡ【AbstractInthisrc爆carch,HPLC、microbiologicalassayandELISAwcreestablishedfordeterminationofFQsdrugsresiduesinmilk.,aimingtosevereresiduesprobleminmilktoOUrcountyandh

6、avingrioperfectmonitoringsystem,andacomparativestudyhadbeendonefor’threedeterminationmethods.Inordertoprovidetheoreticalbasisandtechnicalreferencetodifferentscaledairyenterpriseandqualitycontroldepartment1.HPLCwasestablishedfordeterminationofEnrofloxacin、Ci

7、profloxacinandNorfioxacinresiduesinmilk.Mi墩sampleswasextractedbyPBSandpassedMilliporefilter,finallydeterminedtouseHPLC、歷tIlfluorescencedetector.ThesestandardcurveswclqesatisfyinglinearityintherangeofO.005"-0.5ug/mL(r--0.9997"-'0.9998).n圮detectlimitofthistes

8、twasO.005IIg/mL.ThemeanrecoveryatfortifiedlevelofO.05ug/II兒、O.1p舭and0,2IJg/mLWas71.5%~83.8%,thecoefficientsvariations(C.V)werebelowthan10%.TIlistestcanmeettherequirementtodeterminingresiduesinrIli墩.2.A

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