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《蘇云金芽孢桿菌brcllp29菌株cyt2b基因的克隆、表達(dá)與殺蚊活性測定》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要Cyt蛋白是由蘇云金芽孢桿菌以色列亞種(Bacillusthuringiensis．subsp．israelensis，Bti)在芽形成孢階段產(chǎn)生的6．內(nèi)毒素組成。本研究根據(jù)己報道在NCBI上的cyt2B基因序列，設(shè)計特異引物對BtLLP29菌株中總DNA進(jìn)：fTPCR擴(kuò)增，得到大小約為1,000bp的類似訓(xùn)2B基因，對該基因進(jìn)行克隆、表達(dá)，確定了菌株中cyt2B基因的存在，以pGEX—KG為表達(dá)載體構(gòu)建cyt2B基因的表達(dá)重組質(zhì)粒，并對其殺蚊活性進(jìn)行測定，從而試圖探索Cyt2B蛋
2、白的生物活性及其在菌株中的生物功能。結(jié)果表明，經(jīng)PCR擴(kuò)增、克隆、測序，獲得序列大小約為1,000bp的基因全序列，序列里包含兩個ORF，大小分別為789bp和117bp，其qb789bp編碼約為262個氨基酸，與文獻(xiàn)#Cyt2B蛋白的氨基酸大小一致。利用NCBI上的Blast在線軟件進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)10個Btcyt2B基因序列以及多個基因組片段，其中與己報道的cyt2Ba7，cyt2Ba8等5個基因全序列(包括原始基因片段)同源性達(dá)到98％。因此，判斷克隆出來的基因序列為cyt2B基因。經(jīng)SDS．PAGE驗證
3、誘導(dǎo)表達(dá)重組菌株，顯示該蛋白大小約為30kD，確定該基因編碼的蛋白為Cyt2B。取Cyt2B蛋白表達(dá)重組菌株對白蚊伊蚊和致倦庫蚊進(jìn)行毒性測試，與BtLLP29菌株相比，該表達(dá)菌株并不顯示殺蚊活性。關(guān)鍵詞：蘇云金芽孢桿菌，Cyt2B蛋白，克隆，表達(dá)，殺蚊活性福建農(nóng)林大學(xué)碩十學(xué)位論文Cloning，expressionandidentificationthemosquitocidalofthecyt2BgeneinBacillusthuringiensisLLP29AbstractCyttoxinisproduc
4、edbyBacillusthuringiensis．subsp．israelensis(Bti)duringsporulation．Basedonthecyt2BsequencereportedintheNCBI，thisstudyconstructedtwodegeneratedprimers．UsingtheseprimersandthetotalDNAoftheBtLLP29asatemplate，a1,082bpDNAfragmentwasamplifiedbypolymerasechainreact
5、ion(PCR)andclonedintoEcoilJM109．Aftersequencing，thecyt2BproteinWasproducedinEcoilBL21usingpGEX-KGasexpressionvector．Thenucleotidesequenceshowedtwoopenreadingframes(ORF)inthecyt2Bfragment．Onewas789bplong，encodingaproteinof262aminoacide．Itisverysimilarinsizet
6、othereportedCyt2Bprotein．Thehomologysearchofthecloninggenedisplayedthatithad98％similarto5reportedgeneswhichwerereportedascyt2Ba7orcyt2Ba8．SDS—PAGEanalysisindicatedthattheCyt2Bproteinhadamolecularmassofabout30kD，similartothereportedCyt2Baproteinwhichwasprevi
7、ouslybeenshowntoxictomosquitos．ToxicityactivitiesoftherecombinantstrainsweretestedonAedesalbopictusandCulexpipiens#tiga,',s．ComparedwiththewildBtLLP29strain，therecombinantstraindidn’tshowanytoxicingagainstthem．Keywords：Bacillusthuringiensis，Cyt2，cloning，exp
8、ression，mosquitociden福建農(nóng)林大學(xué)碩J：學(xué)位論文引言在上個世紀(jì)，化學(xué)殺蟲劑由于對害蟲毒性強(qiáng)、見效快，廣泛應(yīng)用于農(nóng)、林各方面害蟲的治理。其大面積的使用，不只是嚴(yán)重污染了環(huán)境，而且也導(dǎo)致了昆蟲抗藥性產(chǎn)生的問題。雖然科學(xué)家采取了交叉使用等多種方法，希望以此緩和抗性產(chǎn)生的問題。這在短期內(nèi)具有一定的效果，卻并不利于其長期發(fā)展。因此，研究者一直致力于努力尋找新的殺蟲劑來取代化學(xué)殺蟲劑。生物農(nóng)
