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《蘇云金芽孢桿菌BRCLLP29菌株cyt2基因的克隆、表達及殺蚊活性測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、福建農(nóng)林大學碩士學位論文摘要Cyt蛋白是由蘇云金芽孢桿菌以色列亞種(Bacillusthuringiensis.subsp.israelensis，Bti)在芽形成孢階段產(chǎn)生的δ-內(nèi)毒素組成。本研究根據(jù)己報道在NCBI上的cyt2B基因序列，設計特異引物對BtLLP29菌株中總DNA進行PCR擴增，得到大小約為1,000bp的類似cyt2B基因，對該基因進行克隆、表達，確定了菌株中cyt2B基因的存在，以pGEX-KG為表達載體構建cyt2B基因的表達重組質(zhì)粒，并對其殺蚊活性進行測定，從而試圖探索Cyt2B蛋白的生物活性
2、及其在菌株中的生物功能。結果表明，經(jīng)PCR擴增、克隆、測序，獲得序列大小約為1,000bp的基因全序列，序列里包含兩個ORF，大小分別為789bp和117bp，其中789bp編碼約為262個氨基酸，與文獻中Cyt2B蛋白的氨基酸大小一致。利用NCBI上的Blast在線軟件進行比較，發(fā)現(xiàn)10個Btcyt2B基因序列以及多個基因組片段，其中與己報道的cyt2Ba7，cyt2Ba8等5個基因全序列（包括原始基因片段）同源性達到98%。因此，判斷克隆出來的基因序列為cyt2B基因。經(jīng)SDS-PAGE驗證誘導表達重組菌株，顯示該蛋
3、白大小約為30kD，確定該基因編碼的蛋白為Cyt2B。取Cyt2B蛋白表達重組菌株對白蚊伊蚊和致倦庫蚊進行毒性測試，與BtLLP29菌株相比，該表達菌株并不顯示殺蚊活性。關鍵詞：蘇云金芽孢桿菌，Cyt2B蛋白，克隆，表達，殺蚊活性I福建農(nóng)林大學碩士學位論文Cloning,expressionandidentificationthemosquitocidalofthecyt2BgeneinBacillusthuringiensisLLP29AbstractCyttoxinisproducedbyBacillusthurin
4、giensis.subsp.israelensis(Bti)duringsporulation.Basedonthecyt2BsequencereportedintheNCBI,thisstudyconstructedtwodegeneratedprimers.UsingtheseprimersandthetotalDNAoftheBtLLP29asatemplate,a1,082bpDNAfragmentwasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)andclonedintoE.c
5、oilJM109.Aftersequencing,thecyt2BproteinwasproducedinE.coilBL21usingpGEX-KGasexpressionvector.Thenucleotidesequenceshowedtwoopenreadingframes(ORF)inthecyt2Bfragment.Onewas789bplong,encodingaproteinof262aminoacide.ItisverysimilarinsizetothereportedCyt2Bprotein.The
6、homologysearchofthecloninggenedisplayedthatithad98%similarto5reportedgeneswhichwerereportedascyt2Ba7orcyt2Ba8.SDS-PAGEanalysisindicatedthattheCyt2Bproteinhadamolecularmassofabout30kD,similartothereportedCyt2Baproteinwhichwaspreviouslybeenshowntoxictomosquitos.Tox
7、icityactivitiesoftherecombinantstrainsweretestedonAedesalbopictusandCulexpipiensfatigans.ComparedwiththewildBtLLP29strain,therecombinantstraindidn’tshowanytoxicingagainstthem.Keywords:Bacillusthuringiensis,Cyt2,cloning,expression,mosquitocideII獨創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位（畢業(yè)
8、）論文，是本人在指導教師的指導下獨立完成的研究成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標注和致謝中已作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同對本研究做出貢獻的同志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意，如被查有侵犯他人知識產(chǎn)權的行為，由本人承擔應有的責任。學位（畢業(yè)）論文作者親筆簽名
