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《豬偽狂犬病病毒雙重pcr鑒別方法的建立》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、130廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)2015年第17期豬偽狂犬病病毒雙重PCR鑒別方法的建立李?艷，李?段，向?蓉，劉燕玲，蔣智勇，張樂宜，蔡汝健，李春玲（廣東省農(nóng)科院動(dòng)物衛(wèi)生研究所/廣東省畜禽疫病防治研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣東省獸醫(yī)公共衛(wèi)生公共實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510640）摘?要：根據(jù)GenBank已發(fā)表的豬偽狂犬病毒（PRV）的gB、gE基因序列，分別設(shè)計(jì)了2對(duì)特異性引物，建立了一種鑒別診斷豬偽狂犬病病毒野毒與疫苗毒的雙重PCR檢測(cè)方法。應(yīng)用該方法可從野毒基因組中擴(kuò)增出與預(yù)期大小相符的2條特異性條帶，分別為122bp（gE）和246bp（
2、gB）；從疫苗株基因組中僅擴(kuò)增出1條特異性條帶，為246bp（gB）。結(jié)果顯示，該方法靈敏度高、特異性強(qiáng)，適用于PRV的臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查。關(guān)鍵詞：偽狂犬病病毒；雙重PCR；鑒定中圖分類號(hào)：S828文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1004-874X（2015）17-0130-04EstablishmentofduplexPCRassayforidentificationofpseudorabiesvirusLIYan，LIDuan，XIANGRong，LIUYan-ling，JIANGZhi-yong，ZHANGLe-yi
3、，CAIRu-jian，LIChun-ling（InstituteofAnimalHealth，GuangdongAcademyofAgriculturalSciences/GuangdongOpenLaboratoryofVeterinaryPublicHealth/GuangdongLaboratoryforAnimalDiseases，Guangzhou510640，China）Abstract：BasedonthegBandgEgenesofpseudorabiesvirus（PRV），twopairsofsp
4、ecialprimersweredesigned，duplexPCRfordistinguishingthewildstrainandvaccinestrainofPRVwasestablished.BythisduplexPCRassay，twospecificfragmentsof122bp（gE）and246bp（gB）weresimultaneouslyamplifiedfromfieldisolateDNA，onlya246bp（gB）fragmentwasamplifiedfromvaccinestrain
5、DNA.Theresultsindicatedthatthemethodwasspecific，sensitive，andcouldbeusedforrapiddiagnosisandepidemiologicalinvestigationofPRVinfection.Keywords：pseudorabiesvirus；duplexPCR；identification［4-5］豬偽狂犬病（pseudorabies，PR）是豬偽狂犬母豬繁殖障礙。該病毒除感染豬外，還可感染［2，6］病毒（pseudorabiesviru
6、s，PRV）侵染多種家畜和其他動(dòng)物，如羊、牛、狗、鼠等。20世紀(jì)70年野生動(dòng)物引起的急性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織代以來，我國廣泛使用PRVgE基因缺失疫苗進(jìn)行（WorldOrganizationforAnimalHealth，OIE）列為PR防控，但疫苗無法清除豬體內(nèi)已感染的野毒，［1］法定報(bào)告疾病。該病以發(fā)熱、奇癢（豬除外）及造成野毒長期在機(jī)體內(nèi)潛伏、復(fù)制并不斷向外排［2-3］神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和腦脊髓炎為主要特征。PRV可毒，因此無法真正消除該病。2011年下半年以來，引起仔豬神經(jīng)癥狀甚至死亡、嚴(yán)重的呼吸道疾病及我國多
7、個(gè)使用gE基因缺失弱毒疫苗免疫的規(guī)?；?］豬場(chǎng)出現(xiàn)了PRV野毒感染，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)收稿日期：2015-05-12重經(jīng)濟(jì)損失。因此，迫切需要建立可準(zhǔn)確區(qū)分PRV基金項(xiàng)目：廣東省科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目（2012A020野毒和疫苗毒的簡(jiǎn)單、敏感和特異的檢測(cè)方法。200014，2013B020202002）；廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體gB基因是PRV所有糖蛋白中最保守的基因，系建設(shè)專項(xiàng)（粵農(nóng)［2009］380號(hào)）；廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院也是病毒復(fù)制不可缺少的基因，該基因可用于區(qū)分院長基金（201313）；粵北生豬生產(chǎn)及疫病防控協(xié)同創(chuàng)新
8、［8］PRV和其他病毒。而gE基因是PRV的主要毒發(fā)展中心項(xiàng)目力基因之一，目前世界各國廣泛使用的PRV基因作者簡(jiǎn)介：李艷（1980–），女，博士，助理研究員，缺失疫苗多為gE基因缺失苗，gE基因可用于區(qū)分E-mail：cyhlly@126.com［9］通訊作者：李春玲（1965-），女，博士，研究員，PR野毒和疫苗毒。鑒于此，本研
