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《農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大白菜和菜心遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大白菜和菜心遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建姓名：劉任源申請學位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學指導(dǎo)教師：魏佑營20120611山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文中文摘要本試驗以大白菜“北京80號"、“油青矮腳45天菜心”、“四季菜心王"為試材，以帶柄子葉為外植體，研究了不同基因型、苗齡、激素組合、預(yù)處理條件及瓊脂濃度對白菜類作物不定芽再生的影響，建立了白菜類作物較高再生頻率的再生體系。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將質(zhì)粒pBIBast．-gus．intro分別導(dǎo)入“油青矮腳45天菜心"、“四季菜心王”，利用GUS組織染色分析法研究了根癌農(nóng)桿菌菌液濃度
2、、侵染時間、預(yù)培養(yǎng)時間和共培養(yǎng)時間等因素對菜心帶柄子葉遺傳轉(zhuǎn)化的影響，探討了適宜菜心遺傳轉(zhuǎn)化的膦化麥黃酮、卡那霉素和抑菌抗生素的使用濃度，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。以建立的遺傳轉(zhuǎn)化體系為基礎(chǔ)，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將不育基因orfl38和orj222導(dǎo)入菜心。主要研究結(jié)果如下：1．建立了白菜類作物子葉高頻再生體系：‘北京80號’的最佳培養(yǎng)基為MS+5mg／L6-BA+0．5mg／LNAA+2mg／LAgN03，再生頻率為84．1％；“油青矮腳45天菜心”和“四季菜心王”的最佳培養(yǎng)基為MS+0．2mg／LTDZ+1mg／LNAA+2mg／LA
3、gN03，再生頻率分別為73．1％和83．2％。三個基因型的帶柄子葉在0．5～Img／L2,4．D中預(yù)處理3d，再生頻率達84％以上。4--．5d苗齡的外植體誘導(dǎo)不定芽效果較好。瓊脂的濃度以129／L為宜。2．優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系：菜心轉(zhuǎn)化過程中以膦化麥黃酮和卡那霉素為篩選劑，最適濃度分別為10mg／L和8rag／L：抑菌劑選用500mg／L的羧芐青霉素；用OD600=0．8的農(nóng)桿菌侵染10．15分鐘；預(yù)培養(yǎng)3d，共培養(yǎng)2d。3．構(gòu)建了線粒體定位表達載體PBI121．ATPB．orfl38／0r]222。4．利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)
4、化法分別將不育基因D礦38、orf222導(dǎo)入菜心中，轉(zhuǎn)化頻率分別達2．6％和3．1％?！P(guān)鍵詞：大白菜；菜心：農(nóng)桿菌：再生頻率：遺傳轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大白菜和菜心遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建EstablishmentofefficienttransformationsystemofChineseCabbageandBrassicaparachinensismediatedbyAgrobacteriumtumefacienAbstractToestablishhighfrequencyofshootregenerationsysteminBrassica
5、rapa，effectsofgenotype，seedlingage，hormonecombination,2,4-Dandagarconcentrationonshootregenerationfromcotyledonaryexplantswerestudiedwitllthreevarietiesincluding‘BeijingNo．80’，‘45DaysCaixin’and‘FourseasonCaixin'．TheplasmidvectorpBIBast—gus—introwastransferrdeinto‘45DaysCai
6、xin’and’FourseasonCaixin’．AnefficienttransformationmediatedbyAgrobacteriumwasdeveloped．Thefactorsaffectingthetransformationfrequency，suchastheconcentrationsofantibioticstoinhibitthegrowthofAgrobacterium，preculturetimeofcotyledonexplants，concentrationofAgrobacterium，infecti
7、ontime，concentrationofPPTandKanandCO—infectiontimeere．werealsodiscussedbyGUScolorationanalysis．TheplasmidvectorsPBI121-ATPB-orf138／D礦222weretransferrdeinto’FourseasonCaixin’mediatedbyAgrobacterium．Researchresultsaremainlyasfollows：1。Ahigheffectiveregenerationsystemhasbeene
8、stablished．thebestmediumfor‘BeijingNo．80’wasMS+5mg／L6-BA+0．5mg／LNAA+2mg／LAgN03andthefrequ
