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《谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶及其抑制劑在宮頸癌化療中的作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、南方醫(yī)科大學(xué)2006級碩士學(xué)位論文谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶及其抑制劑在宮頸癌化療中的作用RoleofGluthathionesS．Transferaseanditsinhibitorinchemotherapeuticresponseincervicalcancer．=占々學(xué)一指課題來源：自選課題業(yè)’名稱‘位申請人導(dǎo)教師答辯委員會主席答辯委員會成員陳敦金教授張建平教授王子蓮教授肖小敏教授陳春林教授論文評閱人王子蓮教授鐘梅教授全松教授2012年5月6日廣州一i谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶及其抑制劑在宮頸癌化療中的作用博士研究生：黃神姣指導(dǎo)老師：余艷紅教授M．JamesYou副
2、教授摘要背景與目的宮頸癌治療根據(jù)患者的f靨床分期、年齡、一般情況、腫瘤相關(guān)因素等決定治療方案【261。宮頸癌早期(I～I(xiàn)IA期)主要采用手術(shù)治療，巨塊型4cm的宮頸癌IB2及IIA期的患者術(shù)前采用新輔助化療后手術(shù)，局部晚期宮頸癌(IIB~ⅢB期)目前采用放化療同步治療，晚期(iv期)多采用化療加放療【94'951。近年來，由●于聯(lián)合化療的進(jìn)展，宮頸癌的化療也從對晚期復(fù)發(fā)癌的姑息治療變成宮頸癌綜合治療的重要組成部分。尤其是新輔助化療因其能夠縮小局部腫瘤體積、清除或抑制亞臨床轉(zhuǎn)移灶、提高后續(xù)治療的效果，受到日益廣泛的關(guān)注。然而，即使理想的手術(shù)、放療、化療
3、等多種方式聯(lián)合治療，III、IVA宮頸癌患者5年無病生存率不到一半?；熕幬锬退幨侵型砥趯m頸癌治療失敗的主要原因。引起藥物耐藥的原因是多因素的，包括避免凋亡細(xì)胞死亡，改變多種藥物耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)，改變藥物代謝或吸收，和／或谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶過表達(dá)。谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(glutathiones-transferas，GSTs)是一個同源二聚體酶的超基因家族，為重要的II相代謝酶，其主要功能是催化谷胱甘肽和化療藥物、致癌物、環(huán)境污染物等一系列外來物結(jié)合，增加代謝產(chǎn)物水溶性，促進(jìn)其排出，達(dá)到解毒功能。臨床應(yīng)用的許多抗癌藥物，如順鉑、阿霉素、卡氮芥、絲裂霉素等都是
4、GSTs的底物。GSTs基因多態(tài)性可導(dǎo)致酶活性降低或喪失，從而增高宿中文摘要主對某些毒物和致癌物作用的敏感性，增加細(xì)胞毒作用。藥理遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究表明，GSTs基因多態(tài)性與乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌的發(fā)生和化療耐藥相關(guān)。Townsend等的研究顯示GSTs在腫瘤組織中高表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤對多種化療藥物耐藥，提示GST在原發(fā)及繼發(fā)性耐藥中發(fā)揮重要的作用。體外活體實驗顯示，化療影響GSTsmRNA表達(dá)水平。Huang等的研究顯示骨肉瘤細(xì)胞經(jīng)DXR或順鉑(DDP)處理后，GSTPl表達(dá)上調(diào)。GSTPl過表達(dá)引起細(xì)胞對DXR和DDP耐藥。GSTPl抑制引
5、起細(xì)胞凋亡和DNA損傷更明顯【241。人胃腸道癌細(xì)胞暴露于5一FU或CDDP，引起TS、GST-pi和DPDmRNA的表達(dá)上調(diào)，上調(diào)程度與藥物耐藥相關(guān)【911。目前，對化療對GSTmRNA表達(dá)的影響集中于GSTx，而對GSTTl、GSTMlmRNA表達(dá)的影響尚未見報道GSTs抑制劑已經(jīng)形成，并用于調(diào)節(jié)GSTs高表達(dá)的實體腫瘤化療耐藥的調(diào)節(jié)。其中利尿酸(ethacrynicacid，EA)是GSTs抑制劑的重要代表藥。至今為止，唯一的GSTs與宮頸癌化療相關(guān)的報道是SohY等的研究。他們對12例宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌患者化療前后GSTx表達(dá)進(jìn)行了觀察，盡管
6、他們的研究顯示化療后GSTx表達(dá)陽性與預(yù)后差相關(guān)，但由于樣本例數(shù)過小而無統(tǒng)計學(xué)意義【65】。因此，GSTs基因多態(tài)性及化療對GSTsmRNA表達(dá)的影響和GSTs及其抑制劑在宮頸癌化療耐藥中的作用尚不明確。本研究通過對宮頸癌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和GSTs基因分型，檢測GSTsmRNA表達(dá)，使用化療藥物對細(xì)胞進(jìn)行處理，觀察化療對GSTsmRNA表達(dá)的影響；同時采用化療藥物阿霉素(DⅫ)、長春新堿(VCR)和GSTs抑制劑EA對宮頸癌細(xì)胞進(jìn)行處理，觀察藥物對細(xì)胞生長和存活，旨在分析GST基因多態(tài)性及化療對GSTsmRNA表達(dá)的影響，和GSTs及其抑制劑在宮頸癌化療
7、反應(yīng)中的作用。材料和方法1．宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)Hela、Siha、C一33A為宮頸癌細(xì)胞，貼壁生長；Siha、C．33A培養(yǎng)于含II博士學(xué)位論文10％FBS、1％谷氨酞胺的DMEM培養(yǎng)基中；Hela培養(yǎng)于含10％FBS、1％谷氨酞胺的RPMI．1640培養(yǎng)基中；所有實驗用細(xì)胞均于37"C、5％C02、濕度為95％培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2．細(xì)胞GSTs基因分型抽提細(xì)胞DNA，采用特異性引物進(jìn)行PCR擴增分別識別GSTMl／GSTTl野生型和空白等位基因，獲得GSTTl／GSTMl完整的基因分型(GSTTl／Ml+／+、十／-、．／-)；測序分析GSTPl基因序列，
8、使用SequenceScannerSoftwarev1．0分析序列圖，確定GSTPl基因型(Ile105Il
