資源描述：
《谷胱甘肽-s-轉移酶抑制劑設計、合成及篩選》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、重慶醫(yī)科大學碩士學位論文谷胱甘肽--S--轉移酶抑制劑設計、合成及篩選姓名：張靈申請學位級別：碩士專業(yè)：藥物化學指導教師：楊曉蘭201205重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文谷胱甘肽．s-轉移酶抑制劑設計、合成及篩選摘要谷胱甘肽．S．轉移酶(glutathione．S．transferases，GST)主要存在于哺乳動物體內(nèi)，是由相同亞基構成的二聚體；每個亞基有一個活性中心，包含谷胱甘肽結合位點(G．site)和相鄰疏水底物結合位點(H．site)。GST抑制劑可增強細胞毒性藥物抗腫瘤療效或直接抑制腫瘤生長，因此，GST抑制劑的設計與篩選成為研究的重點。本文提取制備豬肝酸。I'生G
2、ST同工酶，建立酶促動力學測定GST抑制劑抑制能力方法，同時設計合成一系列GST抑制劑并進行了篩選。1豬肝酸性GST同工酶制備及表征從豬肝經(jīng)陰離子交換層析和親和層析制備GST酸性同工酶，此GST被純化146倍以上，活性總收率近30％。該GST對GSH和CDNB的‰分別為42btmol／L和O．86mmol／L，屬于隨機雙底物動力學模型。2谷胱甘肽．S．轉移酶酶促動力學測定其抑制劑抑制能力的方法用還原型谷胱甘肽(glutathione，GSH)和1一氯一2,4-二硝基苯(1-chloro．2，4．dinitrobenzene，CDNB)合成m-(2，4-二硝基苯基)一谷胱甘肽(G
3、S．DNB)為候選抑制劑，以GSH與CDNB為底物測定GST在GS．DNB作用下的米氏常數(shù)(‰)和最大反應速度(％)，從而確定GS—DNB對GST的抑制常數(shù)(墨)。GS．DNB對CDNB競爭性廚為(21士1)肛rnol／L(刀=2)；對GSH競爭性膨為(17土1)lamol／L∽=2)。產(chǎn)物GS—DNB是GST的高親和力競爭性抑制劑；測定GST動力學參數(shù)隨抑制劑濃度的變化可篩選其抑制劑。3谷胱甘肽．S．轉移酶抑制劑的設計與篩選通過對參考文獻以及脂水分配系數(shù)(LogP)等相關化學性質(zhì)進行考1重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文查，主要從兩條途徑對GST抑制劑進行設計：一、參照GS．DN
4、B的設計思路，針對G．位點和H．site雙位點設計產(chǎn)物型抑制劑I，即以對氨基苯甲酸作為原料衍生的一疏水化合物與GSH的加合物；二、針對H．site可結合基團設計較大體積疏水抑制劑，用依他尼酸(ethacrvnicacid，EA)，4．丁基苯甲酸，3，5．二甲基苯甲酸，丹磺酰氯等羧酸作為功能基，1，3．丙二胺、1，5．戊二胺、賴氨酸和1,4．丁二胺作為連接臂，得到對稱雙酰胺類疏水型抑制劑II。通過酶促動力學初速度法測定合成的GST抑制劑挺進行篩選。結果發(fā)現(xiàn)：1)大體積的II類抑制劑比I類抑制劑抑制能力強；2)II類抑制劑中N，N’．雙依他尼酰．1，4．丁二胺和N，N’．雙對丁基苯
5、甲酰．1，4．丁二胺都為GST相對GSH的強競爭性抑制，抑制常數(shù)分別為38nmol／L和0．28Itmol／L?？梢?，將低親和力GST抑制劑用柔性短鏈連成對稱結構，有望獲得高親和力GST抑制劑。總之，建立了通過酶促動力學篩選GST抑制劑的方法，通過設計合成并篩選，發(fā)現(xiàn)較高的親和力新型抑制劑，這為發(fā)現(xiàn)新的GST抑制劑作為抗腫瘤藥物增敏劑奠定基礎。關鍵詞：谷胱甘肽．S．轉移酶；酶促動力學；抑制劑；抑制常數(shù)4重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文一DESIGN，SYNTHESISANDSCREENINGOFGlutathione-S-transferase(glutathione—S-tra
6、nsferases，GST)asagroupproteinwithavarietyofbiologicalfunctionswidelyexistinmammals，Itfeaturesasadimeroftwocomposedofidenticalsubunits；eachsub-basehasanactivitycenter,composedofglutathionebindingsite(G-site)andadjacentsparseunderwaterobjectsbindingsites(H-site)．GSTinhibitorsmayenhancetheantit
7、umorefficacyofcytotoxicdrugsordirectlyinhibittumorgrowth．Therefore，thedesignandscreeningofGSTinhibitorsbecomethefocusofthestudy．ThispaperformulatedtheenzymekineticsmethodforthedeterminationinhibitioncapacityofGSTinhibitors，screenedtwoseriesofGSTinh
