硬骨魚類msls基因的結(jié)構(gòu)和功能分析

《硬骨魚類msls基因的結(jié)構(gòu)和功能分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、囊萎夫?qū)W碩士學(xué)位論文硬骨魚類MSLs基因的結(jié)構(gòu)和功能分析StructuralandFunctionalStudyofMaleSpecificLethalsGenesinTeleostFish學(xué)位授予單位：塞差太堂論文答辯日期：圣Q12生魚旦壘旦學(xué)術(shù)誠信聲明呲Y啪2㈣63哪罌帆7她3㈣71茲呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨立進行的研究工作及取得的研究成果。除文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。本人依法享有和承擔(dān)由此論文產(chǎn)生的權(quán)利和責(zé)任。聲明人(簽名)：孫歌伙時間：lOt2．占．f3保護知識產(chǎn)權(quán)聲明本人完全了解集美大學(xué)有關(guān)保

2、留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意集美大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。作者(簽名)：導(dǎo)師(簽名)：時間：20t2．占．孫歇伙互藝薛遺曄似懶伙)J3硬骨魚類MSLs基因的結(jié)構(gòu)和功能分析摘要硬骨魚類在物種進化過程中具有重要的地位，是生物學(xué)研究中的重要模式生物。大黃魚(Larimichthyscrocea)和斑馬魚(Dan而rerio)都屬典型的硬骨魚。大黃魚因其重要的經(jīng)濟價值己逐漸成為研究的熱點，斑馬魚因其代時短，易繁殖和管理的優(yōu)點系重

3、要模式生物，被廣泛應(yīng)用于眾多的生物研究領(lǐng)域。雄性特異性致死基因MSLs(Male-specificlethals)在一些無脊椎動物如果蠅(Drosophilamelanogaster)體內(nèi)發(fā)揮著平衡性別差異的重要作用，但其在硬骨魚類中的作用未見報道，通過對硬骨魚類MSLs基因的結(jié)構(gòu)和功能分析將有助于揭示MSLs基因在結(jié)構(gòu)和功能上的進化歷程。本實驗通過對實驗室構(gòu)建的大黃魚性腺EST數(shù)據(jù)庫進行生物信息學(xué)分析，篩選獲得msll和msl3的部分基因片段，同時根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中已有的其他物種msl2基因序列設(shè)計簡并引物，利用RT-PCR的方法擴增獲得msl2的基因片段。進而利用SM

4、ART-RACE技術(shù)克隆獲得大黃魚MSLs基因Lc—msll、Lc—msl2和Lc—msl3的全長cDNA序列，對其在大黃魚雌雄各組織器官及胚胎發(fā)育各時期的表達情況進行了實時熒光定量PCR分析。擴增獲得大黃魚Lc—msll的基因組序列，并利用生物信息學(xué)軟件對硬骨魚類msll基因進行基因組結(jié)構(gòu)的比較，對硬骨魚類的msll、msl2和msl3進行基因同線性分析。根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中斑馬魚Dr．msll基因mRNA序列，分析其在斑馬魚胚胎發(fā)育過程中的表達、定位和功能。結(jié)果如下：(1)Lc．msll的cDNA序列全長1768bp，包括140bp的5’非編碼區(qū)域、251bp的3’非編

5、碼區(qū)(含19bp的polyA部分)和1377bp的開放閱讀框，可編碼458個氨基酸，預(yù)測其分子量為52．561kDa，等電點為7．57。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，Lc—msll基因在雌雄各組織和胚胎發(fā)育不同時期均有表達，其中在雄性腦中的表達量顯著高于其他各組織(P

6、．msl2的cDNA序列全長2187bp，包括498bp的5’非編碼區(qū)域、141bp的3’非編碼區(qū)(含17bD的polyA部分)和1548pb的開發(fā)閱讀框，可編碼515個氨基酸，預(yù)測分子量為55．772kDa，等電點為9．1l。Lc．MSL2的鋅指結(jié)構(gòu)空間預(yù)測結(jié)果更近似果蠅Dm—MSL2。實時熒光定量PCR顯示，Lc—msl2基因在雌雄大黃魚各組織器官的表達情況類似Lc—msll，各組織中均有表達，且同樣在雄性腦中的表達量顯著高于其他各組織(P<0．05)，Lc—msl2mRNA的量在胚胎多細胞期較低，隨后在囊胚期有顯著升高(P<0．05)，之后各時期Lc．msl2mRNA

7、的量無顯著變化(P>O．05)。msl2基因同線性分析結(jié)果顯示，大多數(shù)真硬骨動物(Euteleostomi)(包括硬骨魚類和哺乳動物等在內(nèi))中都存在一個由ENSDARG00000056262、stagl、pccb和msl2(2of2)4個基因構(gòu)成的保守基因同線群。(3)Lc—msl3的cDNA序列全長3386bp，包括117bp的5’非編碼區(qū)域、1631bp的3’非編碼區(qū)(含18bp的polyA部分)和1638pb的開發(fā)閱讀框，該開放閱讀框可編碼545個氨基酸，預(yù)測分子量為61．997kDa，等電點為9．14。實時