新生24hsd乳鼠海馬神經干細胞體外培養(yǎng)及誘導分化

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1、《中國圖書資料分類法》分類號單位代碼:10660R322.81學號:S090017貴陽醫(yī)學院2012屆碩士學位論文新生24hSD乳鼠海馬神經干細胞體外培養(yǎng)及誘導分化研究生:李紅平導師:康朝勝副教授年級:2009級專業(yè):人體解剖與組織胚胎學2012年5月19日貴陽醫(yī)學院2012屆碩士研究生論文目錄摘要??????????????????????????2前言??????????????????????????3材料與方法????????????????????????5結果??????????????????????????

2、13討論??????????????????????????24結論??????????????????????????27參考文獻?????????????????????????28英文摘要?????????????????????????31致謝??????????????????????????32略縮詞表?????????????????????????34論文原創(chuàng)性說明??????????????????????35附:綜述?????????????????????????361貴陽醫(yī)學院2012屆碩士研究生論

3、文新生24hSD乳鼠海馬神經干細胞體外培養(yǎng)及誘導分化專業(yè):人體解剖與組織胚胎學研究生:李紅平導師:康朝勝副教授摘要目的:建立新生24h內SD乳鼠海馬源性神經干細胞的體外培養(yǎng)方法,探討含或不含細胞因子的血清培養(yǎng)基誘導海馬神經干細胞分化的情況。方法:(1)海馬神經干細胞(hNSCs)分離、培養(yǎng)與鑒定;(2)①hNSCs的誘導分化并檢測神經細胞特有的抗原標志物檢測:分別檢測NSE/NF-200,GFAP,Galc的表達。②將hNSCs分為三組,按不同培養(yǎng)液誘導分化,三組均在同一條件下培養(yǎng),3天后同時收集各組細胞的分化率,并測量各

4、組分化的神經細胞胞體大小,以探索不同培養(yǎng)條件下對神經細胞生長的影響。③電鏡下觀察hNSCs及誘導分化后的神經細胞。(3)流式檢測hNSCs細胞周期。結果:(1)原代及傳代的神經球nestin免疫熒光呈陽性表達。(2)①誘導分化后的神經細胞NSE/NF-200、GFAP、Galc免疫熒光均成呈陽性表達。②不同條件下培養(yǎng)3天后hNSCs的分化率,分別為對照組:(5.28士2.09)%;實驗組1:(87.01士5.43)%;實驗組2:(83.54士6.32)%,實驗1組和實驗2組均能誘導hNSCs分化,其分化率比較,無統(tǒng)計學意義

5、(P>0.05)。分化的神經細胞在不同培養(yǎng)條件下生長情況無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。③電鏡下可觀察到hNSCs、神經元、星形膠質細胞及少突膠質細胞的微細結構。(3)hNSCs細胞周期顯示細胞周期完整。結論:1.體外成功分離、培養(yǎng)并鑒定新生24h內SD乳鼠海馬神經干細胞。2.含或不含細胞因子(EGF、bFGF)的血清培養(yǎng)基均能誘導hNSCs的分化。3.電鏡下觀察到hNSCs及誘導后神經細胞的微細結構,說明所培養(yǎng)的細胞為海馬神經干細胞。關鍵詞:海馬神經干細胞培養(yǎng)分化免疫熒光化學電鏡2貴陽醫(yī)學院2012屆碩士研究生論文前言干細

6、胞生物學(Stemcellbiology)是研究干細胞的一門新學科,也是一種新技術和新產業(yè),主要研究干細胞的各種生命現象、生物學特征,以及干細胞的發(fā)生、發(fā)育、[1]分化等活動規(guī)律及應用。大部分學者認為:干細胞是指存在于胚胎直至成體內具有增殖(Proliferation)、自我更新(Self-renewal)能力以及多向分化潛能的原始細胞。干細胞按其來源分類,可分為胚胎干細胞(Embryonicstemcells,ESCs)和成年組織干細胞(Adultprogenitorcells);根據其分化潛能的大小可分為3類:①全能干

7、細胞(Totipotentstemcell),如受精卵;②多能干細胞(Pluripotentstemcell),如神經干細胞、造血干細胞、表皮干細胞等;③單能干細胞(Unipotentstemcell),也稱定向或專能干細胞。無論是哪種干細胞,都具有兩個顯著的特征:首先是不斷增殖,自我更新;其次是在特定微環(huán)境下能分化為多種不同類型的細胞。[2]神經干細胞(Neuralstemcells,NSCs)是一種多能干細胞,具有自我增殖、自[3]我更新,多潛能分化的能力,能分化為神經元、星形膠質細胞及少突膠質細胞,能[4]提供大量腦

8、組織細胞的一類細胞總稱,被BonnamainV等認為是一種理想的中樞神經移植的供體或載體。在20世紀中葉以前,學者們普遍認為成年哺乳動物中樞神經系統(tǒng)中的神經細胞,在出生后喪失分化能力,逐漸停止神經分化。至20世紀90年代,隨著神經科學的蓬勃發(fā)展,國內外大量的研究證實,胚胎期和成年哺乳動物的神經組[4]織

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