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《胎鼠大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、分化及鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、胎鼠大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)、分化及鑒定作者：胡曉霞，朱筑霞，陳剛，譚新杰【摘要】目的：建立胎鼠大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、分化及鑒定的方法，探討神經(jīng)干細(xì)胞的基本生物學(xué)特性。方法：取孕14d胎鼠大腦皮層，吸管吹打機(jī)械分離制成單細(xì)胞懸液，采用無血清培養(yǎng)和胎牛血清誘導(dǎo)分化，應(yīng)用免疫熒光技術(shù)鑒定神經(jīng)干細(xì)胞及其分化的子代細(xì)胞。結(jié)果：從胎鼠大腦皮層分離的細(xì)胞呈神經(jīng)巢蛋白(Nestin)免疫陽性并能在體外傳代培養(yǎng)，血清誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞可表達(dá)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性抗原微管相關(guān)蛋白2和膠質(zhì)纖維酸性蛋白，誘導(dǎo)分化成的神經(jīng)元能表達(dá)突觸的特異性標(biāo)志Synatophymin0結(jié)論
2、：分離和培養(yǎng)的細(xì)胞能表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞的特異性標(biāo)志物Nestin,并且具有很強(qiáng)的增殖能力和多向分化潛能，屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)干細(xì)胞?！娟P(guān)鍵詞】干細(xì)胞大腦皮質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞分化胚胎大鼠SpragueDawley[Abstract]Objective:Toestablishamethodforisolation,cultivation,differentiationinduction,andidentificationofneuralstemcells(NSCs)fromembryonicratinvitro,andexplorethebasicbiologicalfeature
3、softhesecelIs.Methods:Themesencephalonofratwithconceptusageof13dayswastakenoutanddissociatedintosinglecellsuspensionmechanically,andthenculturedinserumfreemedium.Fetalbovineserumwasusedtoinducecel1differentiation.TheisolatedcelIsandtheirprogenywereobservedbyusingimmunofluorescencetechniqu
4、e.Result：TheisolatedcelIsshowednestinpositivereactionandcouldbeculturedinvitroinseries.Afterbeinginducedbyfetalbovineserum,microtubuleassociatedprotein2(MAP2)andglialfibrillaryacidicprotein(GFAP)whicharespecificantigensinneuronandastrocyteexpressedinthesecells,andsynatophymin,aspecificsig
5、nalofsynapse,wasalsoexpressedinthedifferentiatedneurons.Conclusion：TheisolatedandculturedcelIsareNSCsofcentralnervoussystem,andpossessstrongcapabi1ityofproliferationandpotencyofmultidirectionaldifferentiation.[Keywords]stemcells;cerebralcortex;cel1culture;celldifferentiation;embryo;rats,S
6、praguedawley傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，哺乳動(dòng)物的神經(jīng)組織只有死亡，沒有再生能力。自從上世紀(jì)90年代初科學(xué)家們分離、培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞(Neuralstemcells,NSCs)以來，人們相繼從各種動(dòng)物及人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)分離、培養(yǎng)了NSCs[1,2]。NSCs的發(fā)現(xiàn)不僅打破了神經(jīng)元不會(huì)再生的傳統(tǒng)觀念，而且為許多以往難以治療的神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供了新的治療思路和途徑。2007年6月利用細(xì)胞分離、無血清培養(yǎng)、血清誘導(dǎo)分化及免疫熒光等技術(shù)，證明了本實(shí)驗(yàn)所分離的細(xì)胞群為NSCs,以期為進(jìn)一步使用和研究NSCs奠定理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。1材料與方法1.1材料DMEM/F12.B27、胎牛血清購自
7、GIBCO公司，bFGF、Nestin抗體、突觸素抗體Snaptophysin購自SIGMA公司，MAP2抗體、GFAP抗體購自SantaCruzBiotechnology公司，倒置相差顯微鏡及熒光顯微鏡為NIKON公司產(chǎn)品。1.2NSCs的分離培養(yǎng)[3~5]成年雌性和雄性SD大鼠各1只，體重220-260g,雌雄合籠后，檢查陰栓，見陰栓計(jì)為孕0d;孕14d時(shí)取胎鼠，在解剖顯微鏡下仔細(xì)分離獲得胎鼠大腦皮層,再用DHanks液漂洗，用眼科剪反復(fù)切割組織，再用200目細(xì)胞篩過濾，收集入離心管中，反復(fù)吹打，制成單細(xì)胞懸液，經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)
