木糖還原酶基因克隆及表達(dá)菌株的代謝工程改造

木糖還原酶基因克隆及表達(dá)菌株的代謝工程改造

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1、木糖還原酶基因克隆及表達(dá)菌株的代謝工程改造⑧指導(dǎo)教師簽名:論文評(píng)閱人1:邀筮墊!蜀評(píng)閱人2:邀魚(yú)婆國(guó)評(píng)閱人3:監(jiān)!堡婆閨評(píng)閱人4:逸!魚(yú)婆亟評(píng)閱人5:答辯委員會(huì)主席:委員1:委員2:委員3:委員4:委員5:答辯日期:煎迭熊玉囡l殳BXyloseReductaseGeneCloneandExpressionStrainofMetabolicEngineeringTransformAuthor’Ssignature:~‘●‘Supervisor7Ssignature:Thesisreviewerl:Thesisreviewer2:Thesisrev

2、iewer3:Thesisreviewer4:Thesisreviewer5:ExaminingCommitteeChairperson:ExaminingCommitteeMembers:Committeeman1:Committeeman2:Committeeman3:Committeeman4:Committeeman5:Dateoforaldefence:浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成

3、果,也不包含為獲得逝婆太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名:壘.靜雨簽字日期:如l忙鑰IO日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解逝江太堂有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤(pán),允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝婆太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書(shū))學(xué)位論文作者簽名:壘、靜兩簽字日期:如4年弓月Io日導(dǎo)師

4、簽名:簽字日期;硒N年3月f鑼日致謝歲月如歌,光陰似箭,伴隨著畢業(yè)論文的答辯,短暫的碩士學(xué)習(xí)階段即將結(jié)束,也即將開(kāi)啟一段嶄新的旅程?;厥孜业难芯可模宦纷邅?lái),我要感謝一路陪我走過(guò)來(lái)的老師、同學(xué)、家人和朋友們,謝謝你們的包容、關(guān)心、鼓勵(lì)與支持。由衷地感謝我的導(dǎo)師吳綿斌副教授、林建平教授,他們深厚的理論基礎(chǔ)、活躍的思維、絕好的脾氣、平和的心態(tài)給我留下了深刻的印象,使我受益匪淺。從事基因方面的研究對(duì)我來(lái)說(shuō)是個(gè)很大的挑戰(zhàn),薄弱的基礎(chǔ),不自信的實(shí)驗(yàn)操作,極大地考驗(yàn)我的耐心和自信,然而每個(gè)在我看來(lái)不可逾越的坎面前,吳老師和林老師的及時(shí)指導(dǎo)總能給我撥開(kāi)云

5、霧見(jiàn)日出的感覺(jué),讓我不再惶惶恐恐,讓我在不扎實(shí)的科研過(guò)程中又找到堅(jiān)持的方向和解決問(wèn)題的辦法。另外他們對(duì)大家的關(guān)心和包容是最讓我印象深刻的,老師溫和的脾氣、平和的心態(tài)、無(wú)條件的包容,這些無(wú)不讓我們心存感激,也讓我們?cè)诟惺苤麄兊膶捜莺完P(guān)愛(ài)的同時(shí),學(xué)習(xí)他們的寬容和關(guān)愛(ài),去善待他人。三年的研究生生涯雖然短暫,但老師對(duì)我的教誨對(duì)我的一生都將產(chǎn)生重要的影響。在此,學(xué)生向您表示最誠(chéng)摯、最衷心的感謝。感謝三年以來(lái)與我互勉共勵(lì)的課題組全體成員,特別感謝博士生聞志強(qiáng)、蘇卜利、王濤、袁建峰等,碩士生張正玉、劉超超、王如濤、王明璐、趙炯烽、漏佳偉、陳永露、張堯、張菲

6、菲、張哲、喬沛等,在他們身上,我學(xué)習(xí)到了很多,他們擁有扎實(shí)的理論基礎(chǔ)、優(yōu)秀的科學(xué)素養(yǎng)、良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣,慢慢地在他們的熏陶下,我也改正了一些不好的>--j慣,努力地以更高的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)要求自己。本人能順利完成學(xué)業(yè),與父母、親人、朋友的關(guān)心、幫助和激勵(lì)是分不開(kāi)的,在此向父母、親人、朋友表示衷心的感謝和深深的敬意。她們不僅在學(xué)業(yè)上,還在生活上給予了我許多幫助。向所有關(guān)心和幫助過(guò)本人的老師、同學(xué)、朋友和親人再次表示衷心的感謝!焦靜雨二零一四年一月于求是園摘要木糖醇是一種五碳糖醇,其化學(xué)名稱為1,2,3,4,5.戊醇,分子式為C5H1205,是一種白色結(jié)晶,它

7、的溶解度、溶液密度和折光系數(shù)等理化性質(zhì)與蔗糖基本相同,可以作為蔗糖的替代品和糖尿病人的營(yíng)養(yǎng)劑而受到人們的關(guān)注。本文首先通過(guò)PCR從粗糙脈胞菌(Neurosporacrassa)基因組中獲得目的基因木糖還原酶基因(xr),構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pET30a.xr,并分析重組質(zhì)粒在E.coliBL21(DE3)中的表達(dá)情況。結(jié)果表明分子量大小為38kDa的木糖還原酶(XR)能有效表達(dá),重組菌株XR的比酶活為7.25U/mg。其次,XR為NADPH依賴型的酶,本文通過(guò)PCR從大腸桿菌K-12基因組中分別獲得輔酶再生基因6.磷酸葡萄糖酸脫氫酶基因(grid)和葡

8、萄糖.6.磷酸脫氫酶基因(zwf),構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pCDFDuet-grid、pCDFDuet-zwf、pCDFDuet-gnd.zwf,并分析重組質(zhì)粒

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