sox2、brdu及nestin陽(yáng)性細(xì)胞在穹窿下器內(nèi)分布情況及形態(tài)學(xué)觀察

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1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Sox2、BrdU及Nestin陽(yáng)性細(xì)胞在穹窿下器內(nèi)分布情況及形態(tài)學(xué)觀察姓名：徐彥芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：馬常升；曹翠麗201203中文摘要Sox2、BrdU及Nestin陽(yáng)性細(xì)胞在穹窿下器內(nèi)分布情況及形態(tài)學(xué)觀察摘要目的：觀察穹窿下器中神經(jīng)干細(xì)胞的分布及形態(tài)。方法：選擇健康雄性SD大鼠22只，體重150．1809，隨機(jī)分成兩組：①對(duì)照組(n=12)：不作處理；②用藥組(n=10)。1、制備BrdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型：按照體重50mg／Kg對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注

2、射BrdU生理鹽水注射液。分別于14：00和16：00給藥，連續(xù)給藥三天，制備BrdU模型。2、免疫組織化學(xué)染色：正常動(dòng)物常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，浸蠟包埋，選取含穹窿下器部分，石蠟切片，厚度為5um，分別經(jīng)Nestin和Sox2免疫組織化學(xué)染色，封片后OlympusBX．UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。3、Nestin、Sox2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)染色步驟：正常動(dòng)物常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后選含穹窿下器部分，冰凍切片，厚度為10um，經(jīng)Nestin、SOX2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)染色，甘油

3、封固后OlympusBX．UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。4、BrdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫組織化學(xué)染色：BrdU模型動(dòng)物常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，浸蠟包埋，選取含穹窿下器部分，石蠟切片，厚度為5urn，經(jīng)BrdU免疫組織化學(xué)染色，封片后OlympusBX．UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。。5、BrdU模型動(dòng)物經(jīng)BrdU，Sox2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)染色：模型動(dòng)物常規(guī)麻醉，經(jīng)心灌注，取材，固定，蔗糖浸泡后選含穹窿下器部分，冰凍切片，厚度為10urn，經(jīng)BrdU、Sox2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)染色，甘油封固后Olymp

4、usBX．UCB顯微照相系統(tǒng)觀察照像。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：陽(yáng)性細(xì)胞采用專業(yè)圖像分析軟件Image．ProPlus6．0測(cè)定平均光密度值。用spssl3．0軟件進(jìn)行分析。采用SNK．q檢驗(yàn)，以P<0．05為有顯著性差異。結(jié)果：中文摘要l、甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果觀察光鏡下，經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色后，可以看到SFO內(nèi)有豐富的毛細(xì)血管分布，兩外側(cè)區(qū)有一些較大的血管，血管周圍的組織排列較緊密，核心區(qū)域是微血管。室管膜細(xì)胞呈單層排列，細(xì)胞形態(tài)呈梭形，細(xì)胞表面光滑，細(xì)胞核大小不等，呈橢圓形或圓形。SFO內(nèi)的細(xì)胞分布并不均勻，在大血管周圍，

5、SFO的外周區(qū)以及第三腦室的室管膜層，以上部位的細(xì)胞為大細(xì)胞，胞體較豐滿，染色比較均勻，但突起并不明顯，細(xì)胞核呈橢圓形或圓形。其余部位的細(xì)胞一般較小，主要分布于SFO中心區(qū)的小血管四周。在SFO中心區(qū)分散了一些體積較大的細(xì)胞。血管間隙內(nèi)可見(jiàn)胞漿內(nèi)含有微小氣泡的神經(jīng)內(nèi)分泌樣細(xì)胞，此種細(xì)胞胞體較豐滿，突起較少，且長(zhǎng)度較短。2、免疫組織化學(xué)結(jié)果觀察2．1SOX2：在SFO的冠狀面上可以看到SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞排列緊密，胞核為中等大小，呈圓形或橢圓形，中間部較兩側(cè)邊緣部SOX2陽(yáng)性細(xì)胞多，SFO內(nèi)血管周圍的SOX2

6、免疫陽(yáng)性細(xì)胞較少，室管膜處可見(jiàn)單層排列的SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞，而與SFO相連的海馬腹側(cè)聯(lián)合內(nèi)，只有少量的陽(yáng)性細(xì)胞，側(cè)腦室室管膜的陽(yáng)性細(xì)胞呈單層緊密排列。脈絡(luò)叢未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。SFO兩側(cè)部SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0．37834-0．025l，中間部SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0．51774-0．0352。海馬腹側(cè)聯(lián)合SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為O．2185士0．0473。SFO兩側(cè)部與中間部比較結(jié)果顯示有顯著性差異(尸<0．05)，SFO與海馬腹側(cè)聯(lián)合比較結(jié)果顯示有顯著性差異(P

7、．05)。2．2Nestin：SFO內(nèi)Nestin陽(yáng)性細(xì)胞呈不均勻分布，主要分布于大血管周圍，SFO的外周區(qū)以及第三腦室的室管膜層，血管周圍可見(jiàn)圍繞血管的陽(yáng)性表達(dá)。側(cè)腦室的室管膜內(nèi)可見(jiàn)單層緊密排列的陽(yáng)性細(xì)胞。脈絡(luò)叢內(nèi)也可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。SFO相連的海馬腹側(cè)聯(lián)合內(nèi)，未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。SFO兩側(cè)部比中間部陽(yáng)性細(xì)胞多。SFO兩側(cè)部Nestin免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0．3745士0．0553，中間部Nestin免疫陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值為0．21454-0．0241。SFO兩側(cè)部與中間部比較結(jié)果顯示有顯著性差異(P<

8、0．05)。2．3BrdU：冠狀切面上SFO內(nèi)可見(jiàn)散在的BrdU免疫陽(yáng)性細(xì)胞，由于數(shù)量較少，所有分布位置不恒定。中文摘要3、免疫熒光組織化學(xué)結(jié)果的觀察3．1BrdU、SOX2免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)結(jié)果觀察：SFO內(nèi)可見(jiàn)SOX2免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞排列緊密，胞核中等大小，呈圓形或橢圓形，SOX2陽(yáng)性細(xì)胞分布廣泛，遍布整個(gè)SFO，但中間部較兩側(cè)邊緣部SOX2免疫熒光陽(yáng)性細(xì)胞多，而SFO內(nèi)血管周圍的SOX2免疫陽(yáng)性細(xì)胞較少，