鵝bmp4基因克隆及其對顆粒細胞凋亡的抑制作用研究

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1、萬方數(shù)據(jù)SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationMolecularcloningofBMP4geneanditseffectonapoptosisolgranulosacellsingoosen‘’’●ByYingyingZhang一?一DirectedbyProf．Ji—wenWangAnimalGenetics，BreedingandReproductionMolecularGeneticsandWaterfowlBreedingThecollegeofAnimalScienceandTe

2、chnology，SichuanAgriculturalUniversityYa’an，SichuanProvince，ChinaJune，2014論文指導(dǎo)小組成員塑炒萬方數(shù)據(jù)李亮教授劉賀賀副研究員韓春春副研究員(INJil農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院)本論文由國家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS．43．6)、四川省畜禽育種攻關(guān)項目(2011NZ0099．8)資助本論文在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)“畜禽遺傳資源發(fā)掘與創(chuàng)新利用四川省重點實驗室”完成萬方數(shù)據(jù)論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外

3、，學(xué)位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川f農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名：張宦莒2,,／7年占月f7日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名：蘇宦髫導(dǎo)

4、師簽名：i形壺又砂H年f具＼＼177t加一年6月／1日萬方數(shù)據(jù)摘要BMP4是BMPs蛋白家族中的一員，對卵泡顆粒細胞與膜細胞類固醇激素的分泌以及顆粒細胞分化有著調(diào)節(jié)作用，并且在有些物種上對顆粒細胞的增殖或凋亡也產(chǎn)生影響。而顆粒細胞的增殖與凋亡對卵泡發(fā)育來說至關(guān)重要。因此，本試驗擬探究BMP4對鵝等級前卵泡顆粒細胞增殖或凋亡的影響。通過基因克隆獲得鵝的BMP4基因完整CDS區(qū)序列，并采用實時熒光定量技術(shù)檢測其在不同發(fā)育階段卵泡的顆粒細胞與膜細胞中的相對表達量。通過構(gòu)建其真核表達載體pEGFP—NI．BMP4，使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對顆粒細胞進行轉(zhuǎn)染來探究BMP4對鵝

5、顆粒細胞增殖與凋亡的影響。取得的主要研究結(jié)果如下：(1)鵝BMP4基因CDS區(qū)序列全長為1212bp，其核苷酸序列與斑胸草雀的同源性高達96．3％，編碼的氨基酸序列同源性為98．3％。(2)鵝BMP4基因mRNA在顆粒細胞中的相對表達量均高于其在相同卵泡發(fā)育階段的膜細胞中的表達量(卵泡直徑為6～8mm的發(fā)育階段除外)。BMP基因mRNA在小卵泡顆粒細胞中表達量較低，隨后表達量逐漸上升，于直徑8～10ram的卵泡及F5中表達量達到最高，隨后又開始迅速下降。膜細胞BMP4基因mRNA表達量在直徑6～8mm的卵泡中最高，且這一卵泡發(fā)育階段中BMP4基因mRNA在膜

6、細胞表達量要高于顆粒細胞，而在卵泡其他發(fā)育階段中膜細胞BMP4mRNA表達量均低于顆粒細胞。(3)顆粒細胞轉(zhuǎn)染36h后，BMP4轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染組OD值顯著高于對照組(P

7、詞：鵝；顆粒細胞；凋亡；BMP4萬方數(shù)據(jù)MolecularcloningofBMP4geneanditseffectonapoptosisofgranulosacellsingooseByYingyingZhang(AnimalGenetics．Breeding&Reproduction)DirectedbyProf．WangJi-wenAbstract：BMP4asamemberofBMPs，affecttingtheproductionofsteroidshormonethatseretesbygranulosacellsandthecacellsand

8、thedifferentiationofgranul