鵝gnih及其受體基因的克隆、組織表達以及在顆粒細胞中的研究

鵝gnih及其受體基因的克隆、組織表達以及在顆粒細胞中的研究

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1、萬方數(shù)據(jù)SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationCloningofgooseGnIHanditsreceptor,thegeneexpressionandresearchingranulosacellsByGanChaoDirectedbyProf.LiLiang&Prof.WangJiwenAnimalGenetics,BreedingandReproductionMolecularGeneticsandWaterfowlBreedingCollegeofAnimalSciencea

2、ndTechnology,SichuanAgriculturalUniversityYa’an,SichuanProvince,ChinaJune,2014萬方數(shù)據(jù)論文指導小組成員韓春春副研究員劉賀賀副研究員f刪趔刪舢舢舢舢刪棚舢JO120861”本論文由國家水禽產(chǎn)業(yè)技術體系(課題編號:CARS一43—6)、I四)il省畜禽育種攻關項目(課題編號:2011NZ0099—8)和I四)il教育廳創(chuàng)新團隊項目(項目編號:13TD0034)資助本試驗在四川農(nóng)業(yè)大學“畜禽遺傳資源發(fā)掘與創(chuàng)新利用四川省重點實驗室"完成萬方數(shù)據(jù)論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:所呈交的學

3、位論文是我個人在導師指導下進行研究工作所取得的成果。盡我所知,除了文中特別加以標注和致謝的地方外,學位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學或其它教育機構的學位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:者Z互砂刀驢年石月『/日關于論文使用授權的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定,即:學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版,允許論文被查閱和借閱,可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。

4、同意四川農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學位論文的全部或部分內容??诒菊撐牟槐C???诒菊撐谋C?,在年解密后適用本授權。(請在以上口內劃“√”)研究生簽名:魄鋤簽名:孝歷沙,,蘆年‘月f7日洳7V年廠月f7日萬方數(shù)據(jù)摘要促性腺激素抑制激素(GnlH)能以劑量依賴的模式作用于垂體前葉減少促性腺激素的釋放,是目前發(fā)現(xiàn)的唯一能抑制生殖系統(tǒng)發(fā)育和功能的神經(jīng)肽。GnlH能從下丘腦、垂體和性腺三個方面同時對繁殖進行調節(jié)。除了繁殖方面,它還在壓力反射、攝食調節(jié)和季節(jié)性繁殖等多個方面起著重要的調節(jié)作用。為了研究GnIH對鵝繁殖的影響,本試驗檢測了GnlH及

5、其兩個受體RFRPR和NPFFR在產(chǎn)蛋高峰期母鵝不同組織中的表達,并以鵝卵巢顆粒細胞為研究模型,通過添加不同濃度的外源GnlH處理,分析了GnlH對鵝卵巢顆粒細胞功能的影響。主要研究結果如下:(1)獲得了GnlH前體mRNA、RFRPR、NPFFR的編碼區(qū)部分CDS區(qū)序列。通過序列分析和氨基酸比對,發(fā)現(xiàn)RFRPR與MD職尺之間堿基序列的同源性為65.35%,并且都具有7個相似的氨基酸跨膜結構域。(2)分析了GnIH前體mRNA在產(chǎn)蛋高峰期母鵝不同組織的表達模式。發(fā)現(xiàn)GnlH在下丘腦中的表達最高,除了腦部外,在腎上腺、輸卵管和卵巢中也有表達,說明GnI

6、H主要的合成場所是下丘腦。(3)RFRPR和NPFFR主要在腦部表達。RFRPR更符合GnIH免疫神經(jīng)纖維的分布,推測RF即R是鵝GnlH的主要受體。R職PR在腎上腺和眼球中的表達,表明GnlH參與了壓力反射和季節(jié)性繁殖調控。R職瞅在卵巢中也有表達,表明GnIH能直接調控卵巢的功能。(4)以體外培養(yǎng)的鵝卵泡顆粒細胞為研究模型,通過在培養(yǎng)基中人為地添加外源GnlH(0、0.1、10、1000ng/m1)處理細胞,結果表明GnlH能影響顆粒細胞類固醇激素的合成與分泌。外源的GnlH能降低顆粒細胞中StAR、3口一HSD和CYPl9基因的表達,也能減少雌二

7、醇和孕酮的分泌。(5)外源GnlH能夠降低顆粒細胞的活性,促進細胞的凋亡而減少細胞的增殖,降低細胞中C例D,、CCND2和Bcl一2基因的表達。(6)在GnlH處理的細胞中,GnIH能下調LH-R和FSH-R的表達,但對GnRH和顯瞅尸R的表達影響卻并不顯著,表明GnlH對顆粒細胞的調控可能是通過LH-R和FSH-R來實現(xiàn)的。關鍵詞:鵝;GnIH;顆粒細胞;繁殖調控萬方數(shù)據(jù)CloningofgooseGnIHanditsreceptor,thegeneexpressionandresearchingranulosacellsByGanChao(Ani

8、malGenetics,Breeding&Reproduction)DirectedbyProf.LiLia

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