廣西巴馬小型豬apoe的表達(dá)、真核載體構(gòu)建及功能驗(yàn)證

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1、分類號(hào)S墨13:3UDC碩士學(xué)位論文密級(jí)廣西巴馬小型豬卻DE的表達(dá)、真核載體構(gòu)建及功能驗(yàn)證蘇秀珍學(xué)科專業(yè)動(dòng)塑遑籃直弛皇繁殖指導(dǎo)教師郭亞薟數(shù)援論文答辯日期2Q13生魚月三旦學(xué)位授予日期答辯委員會(huì)主席夔塑生硒究雖廣西大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性和使用授權(quán)聲明本人聲明所呈交的論文,是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。除已特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果,也不包含本人或他人為獲得廣西大學(xué)或其它單位的學(xué)位而使用過的材料。與我一同工作的同事對(duì)本論文的研究工作所做的貢獻(xiàn)

2、均已在論文中作了明確說明。本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下所完成的學(xué)位論文及相關(guān)的職務(wù)作品,知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬廣西大學(xué)。本人授權(quán)廣西大學(xué)擁有學(xué)位論文的部分使用權(quán),即:學(xué)校有權(quán)保存并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的復(fù)印件和電子版,允許論文被查閱和借閱,可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播,可以采用影印、縮印或其它復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于:口保密,在年解密后適用授權(quán)。日不保密。(請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”)論文作者簽名礪、鷹嗡指導(dǎo)教師簽名:行鄉(xiāng)鳥L作者聯(lián)系電話:?研.『-779瑤紹日期:汐f

3、多罩‘瑪。功目日期LI弓.參.加電子郵箱:砧了2/7伽@吮.∞肌廣西巴馬小型豬和DE的表達(dá)、真核載體構(gòu)建及功能驗(yàn)證摘要阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是繼心臟病、腫瘤、中風(fēng)之后,成為人類死亡的第四大死因,嚴(yán)重危害到老年人身體健康。研究發(fā)現(xiàn),載脂蛋白E(apolipoproteinE,ApoE)與AD高度相關(guān)。因此,本研究以廣西巴馬小型豬為研究對(duì)象,測定了.4poE在不同組織、不同年齡和大腦不同部位的表達(dá)模式;構(gòu)建4pDE真核表達(dá)載體并對(duì)其功能進(jìn)行驗(yàn)證,同時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)ApoE基因小鼠的生

4、產(chǎn),為后續(xù)構(gòu)建廣西巴馬小型豬AD動(dòng)物模型的研究奠定基礎(chǔ)。根據(jù)GenBank公布的豬ApoEcDNA序列設(shè)計(jì)特異引物,利用RT-PCR(1"leversetranscriptionPCR,RT-PCR)分析廣西巴馬小型豬ApoE在心、脾、肝、腎、胰和腦等組織中的表達(dá)情況,并測定了ApoE在不同年齡(10,14,24,>24月齡)豬腦組織中的表達(dá)模式。結(jié)果發(fā)現(xiàn)//poE在腦和胰腺中的表達(dá)最高;老年(>24月齡)豬腦組織中ApoE的表達(dá)量高于其它年齡;免疫組化的結(jié)果顯示,ApoE在前腦皮質(zhì)的表達(dá)量高于海馬組織。將

5、ApoEcDNA序列克隆到pMDl8.T載體,雙酶切并連接構(gòu)建彳pDE真核表達(dá)載體pEGFP-C1.ApoE,利用PKl5和PCI2細(xì)胞對(duì)載體的功能進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示,在兩種細(xì)胞中都檢測到綠色熒光,證明真核表達(dá)載體pEGFP.C1.ApoE在PKl5和PCI2細(xì)胞中均能正常表達(dá)目的蛋白。為了進(jìn)一步驗(yàn)證重組質(zhì)粒的功能,將質(zhì)粒注入小鼠睪丸,自然交配獲得57只F1代小鼠,PCR檢測獲得陽性小鼠2只,轉(zhuǎn)基因陽性率為3.5%。關(guān)鍵詞:廣西巴馬小型豬阿爾茨海默病動(dòng)物模型載脂蛋白ECONSTRUCTIONANDFUNC

6、Tl0NAI,ANAI.YSISOFEIⅨARYOTICEXPI己ESSIONVECTOROFAPOE,ANDTHEANAIYSIS0FEXPRESSIONPROFⅡ正SINGUANGXIBAMAⅣ田m-PIGABSTRACTAlzheimer'sdisease(AD)hasbecamethefourthseriousdiseaseleadingtothehumandeathexceptingforheartdisease,cancer,andapoplexy.Previousstudyindicatedt

7、hattherewerehighlycorrelatedboththeexpressionofapolipoproteinE(ApoE)andtheAD.Therefore,theobjectiveofcurrentstudyistoanalyzetheexpressionprofilesofApoEindifferenttissues,ages,andthedifferentregionsinbraininGuangxiBamamini—pig.Theeukaryoticexpressionvectoro

8、fApoEWasconstructedandthefunctionofrecombinantplasmidwasidentified.Meanwhile,thetransgenicmicewereconductedwiththemethodofinjectiondirectlyinovariesandtestes.Thestudywillmakepreparationfortheconstructionofani

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