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《鴨Ⅰ型干擾素基因的克隆及原核表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、東北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文鴨Ⅰ型干擾素基因的克隆及原核表達(dá)姓名：許麗娜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王君偉2003.6.1摘婪-mllllIII_____-一摘要1受予抗素莛國瘸毒誘導(dǎo)靛捧溺巍單菝縮耱(PBMC)幫藏野壤鰩懿產(chǎn)生鶼一釋糖蛋白．具有顯著的抗病毒作閣。它能干擾病毒的合成與復(fù)制。是機(jī)體抗瘸毒感染的第一道駱期系統(tǒng)。在1995年，Schultz等蘺先克隆如鴇干擾爨(DulFN)，并分別在大腌籽鎣(Ecoli)和COS7繼璉串贏效表達(dá)，發(fā)現(xiàn)重緞稚DutFN對(duì)一些RNA瘸毒有穰強(qiáng)的
2、抗瘸毒能力，對(duì)原代鴨胚肝細(xì)胞中DHBV的復(fù)制有強(qiáng)烈抑制作用。率實(shí)駿參考GenBank發(fā)襲的DuIFN全】
3、芋捌，應(yīng)援Oligo4。l設(shè)計(jì)一對(duì)；l物，袋羯RT-PCR方法擴(kuò)增樽到一段大約600bp的DNA片段。將這個(gè)片段克隆至pMDI8-T載體，序歹IJ分析結(jié)果表明，覺隆的鴨l型干擾素(DuIFN—I)羲囡的開放閱讀柢包括576bp，編強(qiáng)蛋叁堯{擘l令氮萋酸，N寒端熊弱個(gè)蘸拳檻羲基酸是績(jī)號(hào)歉，成熬瓣多默由161個(gè)氨基酸組成。f同GenBank上公布的DuIFN基因進(jìn)行序列比較分析表明，在核瞽酸水平
4、上的同源性塒99．65％，在氨基酸水平上的同源性為98．95％。憾是，DuIFN．1與DulFN．II褶斃，撥營酸承半的葡源往僅鴦31．73％，囂羞酸承平靜葡瀨性為7。58％。與雞、犬和人的I型干擾綮基因進(jìn)行同源性比較，稅核彗酸水平分剮為71．82％、42．86％和39，21％，程氯基酸水平分別為46。88％、t6。36％和16。50％。將DulFN．I基閔特異性的亞克隆委目表達(dá)載體pGEX．6p的BamHl和SalI酶切位點(diǎn)上·重組成粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌TGI和BL21(DE3)PlysS，經(jīng)1．0
5、mmol／L1PTG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)耱霸SDS．PAGE檢灝，褥劐夫魏47ku瓣融合蛋鑫，與蕷麓瓣糖章每。用Antheprot5．0軟件對(duì)DuIFN-I和DulFN的二硫鍵、二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)及比較，襲明二者的二硫鍵、二級(jí)結(jié)構(gòu)無明顯麓異。故捺曲iDulFN．I也有生物學(xué)活性。j。奉臻褒為了解瓣內(nèi)舞鸛
6、蓬干挽紊緩螢酸繆弼演純上靜關(guān)系建供7理論蘞據(jù)，葡辯也為抗鴨瘸毒性疾病提供了～種新型的治療制燜。關(guān)鍵詞鸚；I型予貔素：蒸因竟?。虎?。’t＼廳葭毒≤。。。．。一—型鎏豎簍皇鶩箜鶩圣———————一CLON
7、INGANDPROKARYOCYTEEXPRESSION0FDUCKINTERFERON—IGENEAbstractInterferon．1wasaglycoproteinproducedbyPBMCorfibroblastswhichisinducedbyv{ruses．Interferon一{wasnotableforitsfunctionsofanti—virus．Itcallinterferevirusinsynthesisandreproduction．Itisthefirstdefe
8、ndingsystemofantiviralinfection．Duckinterferon(DulFN)genewasfirstclonedbySchultzin1995，andwasexpressedinE．coliandCOS7ceils，RecombinantDuIFNhadastrongantivirateffecttowardseveralRNAvirusesandwasapotentinhibitorofDuckhepatitisBvirus(DHBV)inprimaryduckh
9、epatocytes。AccordingtothecompletenucleotidesequenceofDulFNpunishedinGenBank，apairofprimersweredesignedwithOligo4．1．Byreversetranscription—polymerasechainreaction(RT-PCR)，aDNAfragmentofabout600bpwasamplified+Andthen，thefragmentwasclonedintopMDl8-Tvect
10、or．Theresultofsequencingshowsthattheopenreadingframe(ORF)ofDuckinterferon-
11、(DulFN+{)genewaSconsistof576bp，andencodesaproteinof191aminoacidsThe30hydrophobicaminoacidsattheN-terminusmayserve∞signaloeptide．MaturepotypeptideofDulFN—lseemstoconsistof16tam
