資源描述：
《豬fcεri的分子特征及其在prrsv感染中的致炎調(diào)節(jié)作用》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、豬FcεRI的分子特征及其在PRRSV感染中的致炎調(diào)節(jié)作用MolecularCharacteristicsandtheInflammtoryRegulationRolesofPorcineFcεRIonPRRSVInfection學(xué)科專業(yè)：生物學(xué)作者姓名：沈夢露指導(dǎo)教師：黃金海教授天津大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院二零一七年五月萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝之處外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得
2、天津大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定。特授權(quán)天津大學(xué)可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤。（保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)說明）學(xué)位論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：簽字日期：
3、年月日簽字日期：年月日萬方數(shù)據(jù)摘要豬繁殖與呼吸綜合癥（PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRS），是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PorcineReproductiveandRespiratory[1]SyndromeVirus，PRRSV）所引發(fā)的一種烈性傳染病。其特有的免疫逃逸機(jī)制，也為其防治帶來了巨大的困難。IgE及其受體FcεR的活化是導(dǎo)致I型過敏反應(yīng)的主要原因。IgE的受體FcεR主要有2類，一類為高親和力受體，即FcεRI，另一類為低親和
4、力受體即FcεRII（CD23）。PRRSV感染后引起機(jī)體迅速的毛細(xì)血管內(nèi)凝血（DIC），導(dǎo)致“藍(lán)耳紅皮”等特有的炎癥病變現(xiàn)象，與I型過敏反應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果類似。目前關(guān)于豬IgE及其受體FcεRI與PRRSV致炎的關(guān)系尚不清楚。本研究擬了解豬FcεRI及其在主要靶細(xì)胞——豬肺泡巨噬細(xì)胞上的表達(dá)情況，探究PRRSV感染引起的特征性的病理變化，對(duì)靶細(xì)胞上IgE受體表達(dá)的影響，了解IgE受體在PRRSV感染中的作用。（1）FcεRI分子的克隆及分析：從豬的肺泡巨噬細(xì)胞成功克隆了豬FcεRI，測序結(jié)果表明，克
5、隆基因與已登陸Genbank的序列同源性在99%以上。在PK-15、PBMC等其他豬源傳代細(xì)胞系未檢測到FcεRI基因。將克隆的序列與其他物種的FcεRI進(jìn)行氨基酸序列比對(duì)和進(jìn)化樹分析，發(fā)現(xiàn)物種間的差異較大，其與長臂猿的相似性最大，也僅有10.1%，表明豬FcεRI在結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)功能上可能具有特殊性；分析了兩類FcεR信號(hào)肽、跨膜區(qū)、糖基化位點(diǎn)、磷酸化位點(diǎn)、抗原決定簇等，發(fā)現(xiàn)FcεRI含有兩個(gè)免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域，而FcεRII不屬于免疫球蛋白超家族，其含有C型凝集素識(shí)別結(jié)構(gòu)域。兩類FcεR均含有多
6、個(gè)磷酸化位點(diǎn)、糖基化位點(diǎn)和抗原決定簇，這些結(jié)構(gòu)特征與其功能密不可分，也為進(jìn)一步研究其信號(hào)傳導(dǎo)提供鋪墊。（2）FcεRI分子的表達(dá)及抗體制備：構(gòu)建了FcεRI的原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、純化獲得了較高純度的FcεRI蛋白；家兔免疫制備了多克隆抗體。利用間接ELISA測定FcεRI多克隆抗體效價(jià)為1：12800。通過Westernblot和免疫熒光實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證FcεRI多抗與細(xì)胞上FcεRI分子具有良好的反應(yīng)性。（3）FcεRI在PRRSV感染中的作用：研究了有無PRRSV抗體參與情況下，巨
7、噬細(xì)胞上FcR的表達(dá)變化。PRRSV、PRRSV-抗體結(jié)合物分別感染3D4/21細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在PRRSV-ADE效應(yīng)下，F(xiàn)cγII、FcεRI的轉(zhuǎn)錄水平明顯上調(diào)，而PRRSV單獨(dú)感染時(shí)FcεRI無明顯變化，推測FcεRI可能參與了PRRSV-ADE效應(yīng)。通過，在易感和不易感的細(xì)胞系中，分別過表達(dá)FcεRI，發(fā)現(xiàn)在PRRSV-ADE效應(yīng)下，I萬方數(shù)據(jù)FcεRI促進(jìn)了PRRSV的內(nèi)化和增殖。轉(zhuǎn)錄組學(xué)和熒光定量PCR檢測結(jié)果表明FcεRI參與了PRRSV感染中抗原提呈和炎性因子的調(diào)控；在ADE效應(yīng)下，PR
8、RSV感染細(xì)胞，F(xiàn)cεRI途徑介導(dǎo)的信號(hào)分子p38、PI3K，細(xì)胞表達(dá)的趨化因子CCR2、MCP-1等明顯下調(diào)。但參與炎癥調(diào)節(jié)的Vav、Akt、PLA2等分子的轉(zhuǎn)錄水平明顯上升，IL-1RA、IL-2、TGF-β等抗炎性細(xì)胞因子明顯下調(diào)，證明在FcεRI與PRRSV感染致炎癥作用密切相關(guān)。綜上研究表明，豬FcεRI在序列及結(jié)構(gòu)上具有一定的特殊性；FcεRI在PRRSV感染致炎癥反應(yīng)中具有重要作用，表現(xiàn)為有無PRRSV抗體下差異的轉(zhuǎn)錄表達(dá)特征，促進(jìn)了PRRSV及抗體復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞，影
