間歇性低氧對(duì)肝細(xì)胞脂代謝的影響及其可能機(jī)制.pdf

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1、中華肝臟病雜志2014年5月第22卷第5期ChinJHepatol，May2014，Vo1．22，No．5·369·間歇性低氧對(duì)肝細(xì)胞脂代謝的影響及其可能機(jī)制孫中新沈薇【摘要】目的探討間歇性低氧對(duì)肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響及其機(jī)制。方法利用三氣培養(yǎng)箱(O2、CO2、N2體積分?jǐn)?shù)分別為2％、5％、93％)8h／d間歇性低氧處理L02和HepG2細(xì)胞1、2、3、4、5d，建立間歇性低氧細(xì)胞模型，油紅O染色及甘油三酯(TG)測(cè)定檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)的脂滴含量，流式細(xì)胞儀及熒光顯微鏡觀察間歇『生低氧對(duì)肝細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的影響，W~~rnblot檢測(cè)ROS對(duì)低氧誘導(dǎo)因子(HI

2、F)-1o【和HIF-2GC蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)，Westemblot檢測(cè)HIF-10【下游與脂質(zhì)代謝相關(guān)的固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白一lc(SREBP-lc)、脂肪酸合成蛋白(FAS)、脂肪分化相關(guān)蛋白(ADFP)的表達(dá)。各組TG含量測(cè)定行2X5的析因方差分析，兩個(gè)樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)的比較用單因素多樣本方差分析，多個(gè)樣本間的兩兩比較用口檢驗(yàn)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組L02和HepG2細(xì)胞內(nèi)油紅O染色可見(jiàn)橘紅色脂滴增多并出現(xiàn)融合現(xiàn)象，TG含量隨著間歇性低氧天數(shù)的增加逐漸增多m=61．83，印G2=104．19，尸值均<0．01)，氧濃度與時(shí)間有交互效應(yīng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

3、義垃=39．50，IeDG2=76．39，尸值均<0．01)。ROS在對(duì)照組熒光顯微鏡下可見(jiàn)有基礎(chǔ)表達(dá)，與對(duì)照組比較，間歇l生低氧處理第2天，肝細(xì)胞內(nèi)ROS熒光指數(shù)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0．703±0．129與3．31土0．198，垃=22．0637l0．617士0．156與2．33±0．42，eDG2：7．2003，尸值均<0．05)，隨著間歇性低氧處理時(shí)間延長(zhǎng)，L02和HepG2細(xì)胞內(nèi)ROS的含量增多m=1021．84，晶eDG2=49．89，尸值均<0．01)。W~~temblot結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組HIF-Io【、SREBP-lc、FAS和ADFP

4、蛋白相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組增加，并且隨時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(L02細(xì)胞：IF_：371．19，啪P_l。=204．49，_AS=38．2，DFP=154．31，P值均<0．05；HepG2細(xì)胞：IF_l=150．84，IREBP_Ic=107．35，AS=279．71，=352．06，JP值均<0．01)，HIF_20【蛋白相對(duì)表達(dá)量在實(shí)驗(yàn)組第1d較對(duì)照組增多(成=20．76，fHeDG2=3．82，P值均<0．05)，此后逐漸降低至第4d低于對(duì)照組(m=3．18，瞄：=2．54，P值均

5、因子和脂肪分化相關(guān)蛋白的表達(dá)，通過(guò)HIF-1o【—sREBP_1c___FAs和ADFP途徑導(dǎo)致肝細(xì)胞脂代謝異常?！娟P(guān)鍵詞】肝細(xì)胞；脂代謝障礙；細(xì)胞低氧，間歇陛，活陛氧，低氧誘導(dǎo)因子Efectofintermittenthypo~daonlipidmetabolisminlivercellsandtheunderlyingmechanismSunZhongrin,ShenWei．DepartmentofGastroentropy,theSecondAfiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversi~Chongqing400

6、010,ChinaCorrespondingauthor：ShenWei,Emaikshenwei315@126．com[AbstraalObjectiveTodeterminetheefectofintermittenthypoxiaonlipidmetabolisminlivercellsandtoexplorethepossiblemolecularpathwaysinvolvedinthisprocess．MethodsAnintermi~enthypoxiacellmodelsystemwasestablishedbyincubatingthehu

7、manhepaticcelllinesL02andHepG2inanatmosphereof2％02，5％CO2and93％N2for8hoursperdayoveraperiodofI，2，3，4or5days．Cellsculturedinnormoxiaconditions(21％O2)servedascontrols．Changesinintracellularlipiddropletsandtriglyceride(TG)levelswereassessedbybiochemicalassaysandoilredstaining．Changesin

8、intracellularreactiveoxyge