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《淀粉樣前體蛋白的突變在aβ形成過程中作用研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、淀粉樣前體蛋白的突變在Aβ形成過程中作用研究張歡歡2015年6月中圖分類號：TQ028.1UDC分類號：540淀粉樣前體蛋白的突變在Aβ形成過程中作用研究作者姓名張歡歡學(xué)院名稱生命學(xué)院指導(dǎo)教師慶宏教授答辯委員會主席張經(jīng)華教授申請學(xué)位工程碩士學(xué)科專業(yè)生物工程學(xué)位授予單位北京理工大學(xué)論文答辯日期2015年6月StudyonProcessingofAmyloidprecursorprotein(APP)mutationsandtheformationofamyloid-βpeptidesCandidateName：HuanhuanZhangSchoolorDepartment:Schoolof
2、LifeScienceFacultyMentor:Prof.HongQingChair,ThesisCommittee：Prof.JinghuaZhangDegreeApplied:MasterofEngineeringMajor：BioengineeringDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence：Jun,2015研究成果聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是我本人在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下進行的研究工作獲得的研究成果。盡我所知，文中除特別標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得北京理工
3、大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的合作者對此研究工作所做的任何貢獻均已在學(xué)位論文中作了明確的說明并表示了謝意。特此申明。簽名：日期：北京理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要阿爾茨海默癥是當(dāng)今威脅老年人身體健康的主要疾病之一，目前還沒有很好的治療方法和藥物。Aβ是阿爾茨海默癥患者腦內(nèi)神經(jīng)炎性老年斑的主要成分。Aβ短肽的產(chǎn)生是淀粉樣前體蛋白（AmyloidPrecursorProtein，APP）依次被β-分泌酶和γ-分泌酶水解而形成的，據(jù)研究Aβ（1-40，1-38）和Aβ（1-42,3-40）較其他形式Aβ更具有淀粉樣蛋白毒性。研究表明，APP基因突變是家族性阿爾茨海默癥的
4、遺傳因素之一，對APP基因突變的深入將有助于加深對阿爾茨海默癥致病相關(guān)通路的認(rèn)識。本課題選取5個APP單核苷酸突變類型：A673T、A673V、E682K、E693G、E693Q，采用重疊延伸PCR的方法獲得5個APP突變基因，雙酶切后將突變基因與pcDNA4質(zhì)粒連接，構(gòu)建重組真核表達質(zhì)粒。以pcDNA4為對照組，分別將pcDNA4/APPWT-mycHis或pcDNA4/APP-mycHis突變質(zhì)粒與pcDNA4/BACE1-mycHis瞬時轉(zhuǎn)染入HEK293細(xì)胞，進行突變基因的表達。采用WesternBlot的方法檢測轉(zhuǎn)染APP突變質(zhì)粒后APP水解切割過程相關(guān)蛋白水平，包括APP蛋白
5、、C99片段等，采用LC-MS/MS檢測Aβ產(chǎn)生過程中生成的三肽、四肽。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與APP野生型相比,A673V、E682K、E693Q三種突變均使APP蛋白水解量增多；雖然相比于APP野生型，E682K、E693G兩種突變均使C99片段的生成量提高，但A673T突變能使C99與C83片段生成量的比率明顯降低。ELISA結(jié)果顯示A673T組Aβ42水平明顯低于APP野生型，其他4個突變組Aβ42水平均高于APP野生型；而A673T組Aβ40水平與APP野生型相比卻無明顯差異，其他4個突變組Aβ40水平均低于APP野生型；Aβ42/Aβ40比率顯示，A673T組Aβ42/Aβ40較APP野
6、生型明顯降低，而其他四個突變組Aβ42/Aβ40比率均明顯高于APP野生型。LC-MS/MS質(zhì)譜結(jié)果顯示A673T組Aβ40和Aβ42水平均降低；A673V和E693Q兩組Aβ40水平降低，Aβ42水平升高；E682K組Aβ40和Aβ42水平均升高；E693G組Aβ40水平升高，Aβ42水平降低。綜合研究結(jié)果，A673T突變能通過調(diào)控毒性Aβ生成量減少，從而對阿爾茨海默癥起到一定保護作用。其他4種突變均能夠促進APP蛋白水解產(chǎn)生Aβ42，這對理解阿爾茨海默癥病理發(fā)生APP機制增加了實驗數(shù)據(jù)支持。關(guān)鍵詞：阿爾茨海默癥；淀粉樣前體蛋白；基因突變；β-淀粉樣蛋白；質(zhì)譜檢測I北京理工大學(xué)碩士學(xué)位
7、論文AbstractCurrently，Alzheimer'sdiseasehasbecomeahealthhazardfortheelderlyinourmajordiseases,andthereisasyetnoeffectivedurgtreatment.AmyloidβplaquesareadefiningcharacteristicofAlzheimerDisease.Aβisa38~43aminoacidpeptide
