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1、中圖分類號：Q291論文編號：HBLG2015-007UDC：密級：公開碩士學位論文LOC401296分子相互作用蛋白的篩選和鑒定作者姓名：王遠學科名稱：病原生物學研究方向：分子細胞生物學學習單位：華北理工大學學習時間:2年提交日期:2015年5月10日申請學位類別：理學碩士導師姓名：陳晶副教授單位：華北理工大學基礎(chǔ)醫(yī)學院王治東副教授單位：北京軍事醫(yī)學科學院論文評閱人：袁麗杰教授單位：華北理工大學基礎(chǔ)醫(yī)學院朱麗華副教授單位：華北理工大學基礎(chǔ)醫(yī)學院論文答辯日期：2015年5月30日答辯委員會主席：湯華教授關(guān)鍵詞：LOC401296；酵母雙雜
2、交技術(shù)；相互作用蛋白；唐山華北理工大學2015年6月ScreeningandIdentificationofInteractionProteinswithLOC401296DissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyWangYuan(PathogenicOrganisms)ProfessorChenJingSupervi
3、sor:PhD.WangZhidongJune,2015獨創(chuàng)性說明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得華北理工大學以外其他教育機構(gòu)的學位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。論文作者簽名：日期：2015年06月07日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本人完全了解華北理工大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：已獲學位的研究生必須按學校規(guī)定提交學位
4、論文，學校有權(quán)保留、送交論文的復印件，允許論文被查閱和借閱；學?？梢詫W位論文的全部或部分內(nèi)容采用影印、縮印或編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行公開、檢索和交流。作者及導師同意論文公開及網(wǎng)上交流的時間：自授予學位之日起；□自年月日起。作者簽名：導師簽名：簽字日期：2015年06月07日簽字日期：2015年06月07日摘要摘要目的采用酵母雙雜交系統(tǒng)，尋找與LOC401296存在相互作用的蛋白，通過對相互作用蛋白的分析，以進一步了解LOC401296的功能。方法1采用酵母雙雜交的方法篩選LOC401296的相互作用蛋白。首先構(gòu)建pDBLeu-loc融合表達載
5、體，再將pDBLeu-loc轉(zhuǎn)入MaV203酵母菌株，并進行毒性和自激活檢測；然后篩選成人肝cDNA文庫，進行陽性克隆三報告基因表型鑒定；最后陽性克隆回轉(zhuǎn)驗證，排除假陽性克隆。生物信息學分析篩選到的陽性克隆。2采用細胞免疫熒光方法聯(lián)合激光共聚焦技術(shù)觀察LOC401296與相互作用蛋白在HEK293細胞中的共定位。結(jié)果1通過酵母雙雜交技術(shù)篩選出了LOC401296相互作用蛋白。成功構(gòu)建pDBLeu-loc融合表達載體，并對篩選到的陽性克隆回轉(zhuǎn)驗證。將得到的陽性基因進行生物信息學分析共得到8個陽性克隆。2成功構(gòu)建pEGFP-GRN、pEGFP
6、-PLSCR1、pEGFP-N4BP2L2三個融合表達載體。采用細胞免疫熒光方法聯(lián)合激光共聚焦技術(shù)觀察LOC401296分別與GRN、PLSCR1、N4BP2L2在HEK293細胞中共定位情況，發(fā)現(xiàn)LOC401296與3個相互作用蛋白均存在共定位。結(jié)論1通過酵母雙雜交技術(shù)篩選LOC401296的相互作用蛋白，共篩選出8個陽性克隆，分別為GRN、PLSCR1、N4BP2L2、FN1、NOTCH3、LTBP3、ADAMTS-L4、EGFL7，這些基因各具功能，這表明了LOC401296參與的生物學過程的多樣性及其作用機制的復雜性。2通過細胞免
7、疫熒光方法聯(lián)合激光共聚焦技術(shù)對LOC401296和GRN、PLSCR1、N4BP2L2進行了細胞內(nèi)定位研究，觀察到LOC401296與GRN、PLSCR1、N4BP2L2在HEK293細胞內(nèi)的表達以及良好的共定位情況，為后續(xù)研究LOC401296的功能提供了線索。圖26幅；表4個；參95篇。關(guān)鍵詞：LOC401296；酵母雙雜交技術(shù)；相互作用蛋白分類號：Q291-I-華北理工大學碩士學位論文AbstractObjectivesByyeasttwohybridscreenouttheinteractingproteinofLOC401296
8、molecules,andthroughwhichtostudythefunctionofLOC401296molecules.Methods1Screeningtheinteractionp
