二穗短柄草CBF2基因載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗性分析.pdf

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2、ｉｔｓ良必ＴＩ席礎(chǔ)：々馬歷講肖斜誠業(yè)大學(xué)；申請學(xué)位級別；碩±學(xué)科專業(yè)園林植物與觀賞園藝論文提交日期２０１５年６月論文笞辯日期；２０１５年６月４日：：２０１授予學(xué)位單位：東北林業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期５年６月—‘．：答辯委員會主席：．山去．：．；，．，妊；山Ｕ．ｖ．…＇、’＇八．＇．－。．二論文評閱人；／、‘’＞‘’一＇一．斗－．．呼Ｖ化．。皆產(chǎn)＇一－如巧弘＇，戶町乂爭竄遂此?；颍?，、１１｜：．品強(qiáng)：桃祕潔道癖．’。＇．．．點．Ｖ：巧巧＾門如共心，再今護(hù)皆：：．磚：’叫’．狂巧－．如記Ｖｎ賴巧ｒ

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4、學(xué)位單位：東北林業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期：２０１５年６月答辯委員會主席：論文評閱人：雜媒抓素乂學(xué)Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｄｅ：１０２２５ＣＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：ＳＩ５０１４ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｇＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＢｒａｃｈｙｐｏｄｉｕｍｄｉｓｔａｃｈｙｏｎＣＢＦ２ｅｎｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｇｐｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＡｒａｂｋ／ｏｐｓｉｓｔｈａｌｉｃｍａＣａｎｄｉｄａ化：Ｌ

5、山ＹｉｉａｊＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：ＺｈａｎｇＹａｎｎｉｐＡｓｓｏｃｉａ化Ｓｕｅｒｖｉｓｏｒ：ＭａＸｕｕｎｐｊＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｒｅｅＡｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒｇｐｐＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：ＯｒｎａｍｅｎｔａｌＰｌａｎｔａｎｄＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅＤａ化ｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅ２０１５，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙ＾摘要本文ｔＵ二穗短柄草Ｃ６Ｆ２基因和擬南芥為研究對象，采用ｇａｔｅｗａｙ技術(shù)構(gòu)建了Ｋ２４

6、－３５Ｓ－Ｃ公Ｆ２，通，將其轉(zhuǎn)入擬南芥基因的植物表達(dá)載體Ｐ過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法。在組培條件下，將轉(zhuǎn)化植株的種子進(jìn)行Ｈ代篩選，得到純合的陽性植株。利用其研究轉(zhuǎn)基因擬南芥種子、幼苗及成苗在干旱、鹽堿脅迫下的生理生化反應(yīng)，探討擬南芥在干旱、鹽堿脅迫下的生理反應(yīng)特性及Ｃ公Ｆ２基因的功能。實驗主要結(jié)果如下：Ｋａｔｅｗａ技術(shù)構(gòu)建Ｃ公巧基因的植物表達(dá)載體Ｋ２４－３５Ｓ－Ｃ公巧使用ｇｙＰ，并通過農(nóng)桿菌ＥＨＡ１０５介導(dǎo)的方法，將二穗短柄草Ｃ公Ｆ２基因轉(zhuǎn)入擬南芥中。將轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)一二１７行卡那霉素篩選，代得到３株陽性植株，代和王代篩選后，得到個轉(zhuǎn)基因擬南芥

7、株系，萌發(fā)率與轉(zhuǎn)化率皆在８０％Ｗ上。將７個株系進(jìn)行ＰＣ民鑒定，皆得到目的條帶，即成功獲得７個轉(zhuǎn)二穗短柄草Ｃ公Ｆ２基因斌南芥株系。２、取萌發(fā)率和轉(zhuǎn)化率皆在９０％Ｌ：Ｉ上的３個Ｔ３代轉(zhuǎn)基因擬南芥株系的種子及植株進(jìn)行抗旱性實驗。結(jié)果表明在種子階段轉(zhuǎn)基因與野生型擬南芥的抗旱性無明顯差異。幼苗時期，甘露醇濃度為１００、１５０、２００、２５０、３００ｍｍｏｌ／Ｌ時，轉(zhuǎn)基因幼苗根長增長量顯著，說明轉(zhuǎn)基因幼苗時期抗旱性增強(qiáng)，高于野生型幼苗。而在苗期的干旱處理中轉(zhuǎn)基因擬一南芥在表型上與野生型有定差異，表現(xiàn)出了更強(qiáng)的生命力，轉(zhuǎn)基因植株遭遇干旱脅迫后，Ｍ

8、ＤＡ與外滲電導(dǎo)率值皆顯著低于野生型植株