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《烏賊墨多糖干預(yù)環(huán)磷酰胺介導(dǎo)小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡與自噬的機制研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號：TP242.2密級：UDC:621.865.8學(xué)號：2111204308廣i海洋太考碩士學(xué)位論文烏賊墨多糖干預(yù)環(huán)磷酰胺介導(dǎo)小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡與自噬的機制研究谷毅鵬指導(dǎo)教師：劉華忠教授串請學(xué)位類別：工學(xué)碩士專業(yè)名稱：水產(chǎn)品加工及貯藏工程研究方向：海洋生物活性物質(zhì)研究與開發(fā)學(xué)院名稱：食品科技學(xué)院中國?湛江2015年6月學(xué)位論文答辯委員會組成主席：委員：導(dǎo)師：時間：2原創(chuàng)性聲廣東海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對本文的研
2、究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)廣東海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于1、保密□，在______年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密□√。（請在以上相應(yīng)方框內(nèi)打“√”）作者簽名：年月日導(dǎo)師簽名：年月日烏賊墨多糖干預(yù)環(huán)磷酰胺介導(dǎo)小鼠睪丸生殖細(xì)胞凋
3、亡與自噬的機制研究摘要環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CP）是目前臨床上應(yīng)用最廣泛的烷化劑，本身并無抗腫瘤活性，只有在體內(nèi)經(jīng)代謝后才發(fā)揮抗癌作用，而丙烯醛（acrolein，ACR）就是CP的主要代謝副產(chǎn)物，但其具有很強的氧化性，能導(dǎo)致性腺損害。大量研究也表明CP對雄性生殖系統(tǒng)具有明顯的損傷作用，但其損傷機制至今尚未明確。本研究從分子角度出發(fā)，對CP的生殖毒性機理進行探討，發(fā)現(xiàn)CP代謝產(chǎn)物引起的睪丸氧化應(yīng)激損傷并誘導(dǎo)生殖細(xì)胞凋亡可能是其產(chǎn)生生殖毒害的重要因素。結(jié)果顯示，經(jīng)CP處理后，小鼠出現(xiàn)明顯的體重減輕，睪丸曲細(xì)精管空洞化，生精細(xì)胞層數(shù)減少，精子大量畸形；睪丸組織氧化
4、/抗氧化平衡被破壞，細(xì)胞內(nèi)ROS和MDA含量都明顯升高，而抗氧化酶SOD和CAT的活力均顯著下降，生殖細(xì)胞出現(xiàn)氧化應(yīng)激損傷，細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損；精原細(xì)胞和Sertoli細(xì)胞內(nèi)核碎斷或固縮，大量線粒體腫脹且內(nèi)嵴消失，Leydig細(xì)胞中產(chǎn)生大量自噬泡，并且有自噬體產(chǎn)生；TUNEL檢測睪丸組織中細(xì)胞凋亡率明顯上升，凋亡的陽性細(xì)胞主要分布于精原細(xì)胞層內(nèi)；Westernblot檢測睪丸內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin-1的表達(dá)量也顯著上調(diào)，免疫熒光檢測這兩種蛋白主要集中表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞層內(nèi)。說明在該條件下，精原細(xì)胞和Sertoli細(xì)胞以凋亡為主，Leydig細(xì)胞以自噬為主。體外實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用CP代
5、謝產(chǎn)物ACR刺激Leydig細(xì)胞后，細(xì)胞活力隨ACR濃度呈劑量依賴性下降，細(xì)胞內(nèi)T-AOC、SOD活力也都顯著下降，MDA含量明顯升高，細(xì)胞氧化應(yīng)激嚴(yán)重；Leydig細(xì)胞分泌睪酮的功能也明顯受損；Leydig細(xì)胞在ACR的刺激過程中，分別出現(xiàn)明顯的自噬和凋亡，其中自噬早于凋亡發(fā)生，一旦自噬被抑制便會引發(fā)凋亡，暗示凋亡和自噬之間是對抗關(guān)系。自噬和凋亡可相互調(diào)節(jié)，兩者之間也存在著相同的調(diào)控因子，如p38MAPK和PI3KI/Akt信號通路。本研究結(jié)果顯示，在CP誘導(dǎo)的自噬和凋亡中，p38MAPK和PI3K/Akt信號通路均被激活。在Leydig細(xì)胞的體外試驗中還發(fā)現(xiàn)，p38MAPK不僅
6、促進ACR誘導(dǎo)的自噬，當(dāng)自噬能力超負(fù)荷時，p38MAPK通路還能啟動促凋亡程序，誘導(dǎo)凋亡。烏賊墨多糖（squidinkpolysaccharides，SIP）是具有化療保護作用的海洋活性物質(zhì)，對CP造成的雄性生殖毒害具有明顯的抑制作用。本研究以SIP的純化組分SIP-1作為細(xì)胞保護劑，以期在細(xì)胞與分子水平上去精確闡釋SIP干預(yù)CP致細(xì)胞毒性的分子機理。結(jié)果顯示，SIP-1能有效緩解CP對睪丸組織的氧化損傷，提高睪丸中SOD和CAT的活力并降低MDA的含量，清除組織內(nèi)積累的過量ROS，防止睪丸曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)損傷，提高生精細(xì)胞數(shù)目，降低畸形率，避免小鼠體重的下降。體外條件下，ISIP-1
7、也能對ACR刺激下的Leydig細(xì)胞產(chǎn)生明顯的保護作用，提高細(xì)胞活力，抑制氧化應(yīng)激損傷，還能減弱ACR對睪酮分泌的抑制作用，保護Leydig細(xì)胞的分泌功能。說明SIP-1主要通過其抗氧化作用來啟動其細(xì)胞保護作用。SIP-1對細(xì)胞內(nèi)氧化/抗氧化平衡的維持，可避免劇烈的氧化應(yīng)激作用對線粒體結(jié)構(gòu)的破壞，并阻斷凋亡執(zhí)行因子Caspase-3的激活，下調(diào)Bax/Bcl-2比率，從而抑制生殖細(xì)胞的凋亡。同時，SIP-1也能降低細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ的高表達(dá)
