烏賊墨多糖sip-1干預環(huán)磷酰胺介導小鼠卵巢細胞凋亡與自噬的研究

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1、學位論文答辯委員會組成主席：委員：霄盹渡一力觚爭獻壢導師：捌獷妒么∥汐時閽．洲}．易．口Ic，弋廣東海洋大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導師的指導下獨立進行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。作者簽名：f匐p丁穆20侈年莎月，日學位論文版權使甩授權書本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查

2、閱和借閱。本人授權廣東海洋大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。本學位論文屬于1、保密口，在年解密后適用本授權書。2、不保密口。(請在以上相應方框內(nèi)打“√”)作者簽名：導師簽名：20t{；年b具f日20f夕年易月』日烏賊墨多糖SIP一1干預環(huán)磷酰胺介導小鼠卵巢細胞凋亡與自噬的研究摘要烏賊墨多糖(Squidinkpolysaccharide,SIP)是從廢棄物烏賊墨囊中分離提取得到的具有諸多生物學功能的海洋生物活性物質(zhì)。前期研究發(fā)現(xiàn)SIP對環(huán)磷酰胺(CP)致小鼠腎、肺、肝、睪丸、卵巢損傷具有保護作用。本

3、文旨在探討烏賊墨多糖分離純化后的組分SIP．1的結(jié)構及其干預環(huán)磷酰胺介導卵巢細胞凋亡與自噬的機制。本研究經(jīng)酶法提取、乙醇沉淀方法分離提取得到粗多糖，然后經(jīng)過DEAE．52纖維素柱層析和SephacrylS-300HR凝膠滲透色譜進行分級純化，得到三個糖組成相對單一組分SIP-1、SIP．2、SIP．3，以SIP．1為研究對象，對其純度進行測定。分離純化得到SIP．1經(jīng)紫外掃描顯示260am及280nm處無吸收峰，說明SIP．1不含有核酸、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。通過高效液相色譜分析，結(jié)果顯示只有一個峰形較對稱且峰寬較窄的峰，說明組分SIP．1較純。對SIP．1進行初級結(jié)構分析。紅外光譜對

4、其結(jié)構進行表征，結(jié)果分析顯示SIP．1在波數(shù)3385．96cm‘1處有很強O．H伸縮振動和N．H伸縮振動，在波數(shù)2931．23cm"1處有C．H伸縮振動，1637．74cm以處是氨基N-H變角振動，1077cm‘1和1034．2Icm。1是多糖羧基中C．O伸縮振動峰。將SIP．1進行完全酸水解，利用高效液相色譜法進行單糖組成分析，結(jié)果表明SIP．1含有氨基半乳糖(GalN)、阿拉伯糖(Ara)，其摩爾比為1：1。高碘酸氧化、Smith降解分析結(jié)果顯示SIP．1中可能存在1—2、1_3、1—6類型的糖苷鍵。核磁共振1HNMR和13CNMR分析結(jié)果表明，SIP．1中單糖糖苷鍵和構型

5、可能為0【．L．Arap存在l_5糖苷鍵，0【．D．GalNp存在l_6糖苷鍵。40只健康的昆明種雌性小白鼠，將其隨機分為4組：空白組、模型組、樣品對照組、治療組。15d后，測定小鼠體重、生殖器官重量及指數(shù)、卵巢組織病理學變化及血清激素水平。實驗結(jié)果表明CP對雌性小鼠卵巢具有毒性損傷作用，而SIP．1能緩解CP所致的卵巢生殖損傷作用。與空白組相比，模型組卵巢重量、卵巢指數(shù)、子宮重量及子宮指數(shù)極顯著(尸<0．01)降低，小鼠體重顯著(尸

6、水平(E2)降低。與模型組相比，SIP．1治療組對CP所致的各項指標變化均有明顯的改善作用(P

7、P—Akt表達水平顯著降低(氏0．05或P<0．01)。與模型組相比，SIP．1顯著改善CP所致卵巢的損傷，卵巢細胞的凋亡率顯著降低(尸<0．05)，且SIP．1顯著緩解CP所致Bcl．2、P．AKT表達水平的降低(尸<0．05或P<0．01)及p38磷酸化水平、LC3、Beclinl表達水平的升高(尸<0．05)。說明SIP．1可能通過調(diào)控與凋亡及自噬相關的蛋白的表達水平來緩解CP所致的卵巢顆粒細胞的凋亡與自噬。SIP．1是一種具有新穎結(jié)構的純化的烏賊墨多糖，能有效緩解CP所致的雌性生殖系