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《菲立磁標(biāo)記的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在同種異體移植鼠肝臟中的追蹤觀察》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、菲立磁標(biāo)記的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞在同種異體移植鼠肝臟中的追蹤觀察作者：陳小伍，方馳華，劉勝軍，崔冰，王巖，黃治榮【關(guān)鍵詞】骨髓基質(zhì)干細(xì)胞；菲立磁；磁共振成像；干細(xì)胞移植【Abstract】AIM：Tostudythemethodoftrackingofallogenicallygraftedratbonemarrocells（BMSCs）labeledinedbyPrussianbluestainingandelectronmicroscopy.SuccessfullylabeledBMSCs(2.0mL，1×109
2、/L)aandcaudalvEInoftheSDrats.Sixhoursbeforetransplantationand6h,1,3,and5agicresonanceimaging(MRI)examination(thesequencesusededthelabelingefficiencyissionelectronmicroscopyshoerousironparticlesinthecytoplasmofFeridexlabeledBMSCs.MRI(SET2SCscanbetrackedeffectiv
3、elyinratliverbyMRI.【Keyarrocells；Feridex；magicresonanceimaging；stemcelltransplantation【摘要】目的：研究菲立磁標(biāo)記的大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)在同種異體移植鼠肝臟中的追蹤方法.方法：采用菲立磁（Feridex）對(duì)分離培養(yǎng)的BMSCs進(jìn)行標(biāo)記，Prussianblue染色和電鏡觀察對(duì)標(biāo)記后的BMSCs進(jìn)行鑒定；取鑒定后的BMSCs2mL（1×109/L）分別注射到SD異體大鼠的門(mén)靜脈、肝局部實(shí)質(zhì)、尾靜脈內(nèi)；采用磁共振成像(MR
4、I)技術(shù)（SET2SCs）在一定的條件下，可分化為有功能的肝細(xì)胞，且獲取及體外培養(yǎng)容易，沒(méi)有倫理道德的爭(zhēng)議，可以作為種子細(xì)胞來(lái)治療急慢性肝功能衰竭和修復(fù)肝臟損傷，具有極大的研究?jī)r(jià)值.但同種異體移植后BMSCs在活體肝內(nèi)的定居、遷移和分化機(jī)制尚不清楚.我們利用直徑為納米級(jí)別的超順磁性氧化鐵粒子菲立磁（feridex）對(duì)大鼠BMSCs進(jìn)行標(biāo)記，并利用磁共振成像(magicresonanceimaging，MRI)技術(shù)對(duì)多種途徑同種異體移植的BMSCs在大鼠肝內(nèi)進(jìn)行了定位與追蹤.1材料和方法1.1材料SD清潔級(jí)大鼠（80
5、～100g，2只，供提取骨髓用；200～220g，雄性36只，供同種異體細(xì)胞移植用）購(gòu)自廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室.Feridex購(gòu)自美國(guó)泛華醫(yī)藥公司.DMEM（低糖）培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)GIBCO公司；優(yōu)質(zhì)胎牛血清購(gòu)自?shī)W地利PAA公司；胰蛋白酶購(gòu)自AMERSCO公司；其他化學(xué)試劑為國(guó)產(chǎn)分析純.Olympus相差顯微鏡，HERAEUS超凈臺(tái)，F(xiàn)ORUMCO2培養(yǎng)箱，東芝1.5T超導(dǎo)MRI機(jī)（型號(hào)Exelart/P3）.1.2方法1.2.1BMSCs分離、培養(yǎng)、鑒定及傳代percoll梯度離心法(連續(xù)密度梯度離心分離法)
6、分離純化大鼠BMSCs.采用密度為1.073kg/L的Percoll液分離骨髓液，離心后BMSCs將聚積在第二層.完整取大鼠雙后肢股骨，DHanks液吹吸骨髓.抗凝骨髓經(jīng)低糖的DMEM培養(yǎng)基稀釋.將比重為1.073kg/L的Percoll置試管底部，按照1∶1的比例緩慢滴加稀釋后的骨髓，900g/min離心30min.收獲分離的單個(gè)核細(xì)胞，DMEM洗兩次，接種于24孔板內(nèi)，各孔內(nèi)加入100mL/L胎牛血清，48h后除去非貼壁細(xì)胞，更換新鮮培養(yǎng)液，50mL/LCO2，37℃和飽和濕度的條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)至瓶底90
7、%融合時(shí)，2.5g/L胰蛋白酶消化，傳代培養(yǎng).收集第4代BMSCs，流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD29，CD44，CD45等表面標(biāo)志、成骨誘導(dǎo)后行細(xì)胞堿性磷酸酶染色.具體方法參照2.5組織學(xué)檢查①門(mén)靜脈組：實(shí)驗(yàn)組移植后肝門(mén)部可見(jiàn)聚積的呈藍(lán)色染色的鐵顆粒細(xì)胞，各時(shí)間點(diǎn)組織學(xué)改變基本與MRI影像對(duì)應(yīng)（圖3）.對(duì)照組未見(jiàn)藍(lán)色染色的鐵顆粒細(xì)胞.②肝內(nèi)組：實(shí)驗(yàn)組移植后肝尾狀葉下半部切片可見(jiàn)許多細(xì)胞質(zhì)呈藍(lán)色染色的鐵顆粒細(xì)胞，各時(shí)間點(diǎn)組織學(xué)改變基本與MRI影像對(duì)應(yīng)（圖4）.對(duì)照組未見(jiàn)藍(lán)色染色的鐵顆粒細(xì)胞.③尾靜脈組：實(shí)驗(yàn)組移植后各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)
8、照組比較，肝內(nèi)可見(jiàn)少量分散的呈藍(lán)色染色的鐵顆粒細(xì)胞.對(duì)照組未見(jiàn)藍(lán)色染色的鐵顆粒細(xì)胞.3討論目前廣泛應(yīng)用的幾種細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)，如BrdU法［4］,DAPI法［5］,PKH26法［6］,GFP法［7］,Y染色體標(biāo)記法［8］等，各有其優(yōu)缺點(diǎn)，但均需行組織切片，對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象有創(chuàng)傷性，多需處死實(shí)驗(yàn)對(duì)象.這些方法既不利于在同一個(gè)體內(nèi)連續(xù)、動(dòng)態(tài)的跟蹤觀察，也不可能應(yīng)用于人體.
