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《金釵石斛遺傳多樣性研究的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNAPCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、金釵石斛遺傳多樣性研究的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA-PCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化作者：王燕燕徐紅魏丹紅王崢濤【摘要】目的對(duì)影響金釵石斛隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA（RAPD）-PCR擴(kuò)增效果的一些因素進(jìn)行優(yōu)化，為進(jìn)一步研究其遺傳多樣性奠定基礎(chǔ)。方法對(duì)金釵石斛RAPD分析中一些重要影響因素進(jìn)行比較系統(tǒng)的構(gòu)建和優(yōu)化，建立金釵石斛RAPD穩(wěn)定可靠的反應(yīng)體系。結(jié)果金釵石斛較適宜的RAPD-PCR反應(yīng)條件為：10μlPCR反應(yīng)體系中，5～20ng模板DNA，3.0mmol·L-1Mg2+，0.34mmol·L-1dNTPs，0.6UTaqDNA聚合酶，1.5μmol·L-1引物，較適宜的退火溫度為36℃。結(jié)論所建
2、立的金釵石斛RAPD反應(yīng)體系具有標(biāo)記位點(diǎn)清晰、反應(yīng)系統(tǒng)穩(wěn)定、檢測(cè)多態(tài)性能力較強(qiáng)等特點(diǎn)，可用于金釵石斛的遺傳多樣性研究。以該優(yōu)化的RAPD條件進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性良好。【關(guān)鍵詞】金釵石斛；隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA反應(yīng)體系；優(yōu)化 Abstract：ObjectiveToestablishandoptimizeRAPDPCRsystemofD.nobileLindl.MethodsThereliableRAPD-PCRsystemforthegeneticdiversitystudyofD.nobileLindl.establishedbysystematicallytestin
3、gandoptimizingtheimportantconcentrationsofthefactors.ResultsTheconditionsthatwere15suitableforRAPD-PCRofD.nobileLindl.wereasfollows:10μlPCRreactionsystemcontained5～20ngtemplateDNA,3.0mmol·L-1Mg2+,0.34mmol·L-1dNTPs,0.6UTaqDNApolymeraseand1.5μmol·L-1prime.ThesuitableannealingtemperatureintheRAPD-
4、PCRreactionsystemwas36℃.ConclusionTheRAPD-PCRsystem,whichwasestablishedinthispaperforstudyingD.nobileLindl.,canprovideclear,reliable,abundantpolymorphicmolecularmarkers,stablereactionsystem,andissuitableforstudyingthegeneticdiversityofD.nobileLindl..Theexperimentresultsarereproduciblebasedonthi
5、sconditions. Keywords：D.nobileLindl.;RAPDreactionsystem;Optimization 金釵石斛DendrobiumnobileLindl.又稱金釵石、扁金釵、扁黃草、扁草、黃草，為蘭科(Orchidaceae)石斛屬DendrobiumSw.植物，具有滋陰清熱、生津益胃、潤(rùn)肺止咳的功效，是中藥石斛的主要來(lái)源之一?！侗静菥V目》中記載：金釵石斛可“強(qiáng)陰益精，厚腸胃，壯筋骨，暖水臟，補(bǔ)腎益力，輕身延年”15等，是藥用范圍較廣的名貴中藥；又由于其花型奇特、花色艷麗，而具有較高的觀賞價(jià)值［1］。近年來(lái)，我國(guó)學(xué)者對(duì)金釵石斛的生物學(xué)特性、藥用
6、價(jià)值、人工栽培、化學(xué)成分、藥理、毒理等方面進(jìn)行了較為廣泛的研究［1～3］，而有關(guān)遺傳多樣性方面研究甚少?！ ‰S機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA（RandomAmplifiedPolymorphicDNA,RAPD)技術(shù)是由Williams等于1990年創(chuàng)立的一種DNA分子標(biāo)記方法，它可直接反映染色體組DNA多態(tài)性，能從遺傳本質(zhì)上揭示品種間多態(tài)性及親緣關(guān)系，不受環(huán)境限制，具有操作簡(jiǎn)單快捷、成本低、通用性好、靈敏度高且不需預(yù)先了解基因組的相關(guān)分子生物學(xué)信息等優(yōu)點(diǎn)［4,5］，被廣泛應(yīng)用于種質(zhì)資源分析、生物種群劃分、遺傳相關(guān)分析、遺傳圖譜構(gòu)建、基因定位等方面［6］。 本實(shí)驗(yàn)就模板濃度、Mg2+濃度、dNT
7、P濃度、Taq酶濃度、引物濃度、退火溫度等影響RAPD反應(yīng)的諸因素進(jìn)行了構(gòu)建和優(yōu)化，建立多態(tài)性強(qiáng)、穩(wěn)定性好的金釵石斛RAPD反應(yīng)體系，為進(jìn)一步研究金釵石斛的遺傳多樣性、開(kāi)發(fā)利用這一珍稀藥用資源提供技術(shù)支持?！ ?材料與儀器 1.1材料金釵石斛，新鮮材料于2005年采自云南文山縣，現(xiàn)保存于上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所，材料經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所徐紅博士鑒定原植物學(xué)名。15 1.2儀器PTC-200型PCR儀（MJResearch公司）；凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)
