金龜子綠僵菌松墨天牛優(yōu)良菌株篩選及其林間宿存研究

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1、中文摘要松墨天牛是重大森林植物檢疫性病害一松材線蟲病的主要媒介昆蟲。本論文主要內(nèi)容是篩選防治松墨天牛的金龜子綠僵菌優(yōu)良菌株，并研究金龜子綠僵菌在森林生態(tài)系統(tǒng)中的宿存動(dòng)態(tài)，為利用天敵微生物防治松墨天牛提供菌株資源和理論依據(jù)。從福建的40個(gè)縣(市、區(qū))、江西省井岡山和吉安2個(gè)市，共110個(gè)林分樣區(qū)(其中松林88個(gè)樣區(qū))采集土壤樣品330份，采用選擇性培養(yǎng)基分離土壤金龜子綠僵菌，結(jié)果21個(gè)樣區(qū)(其中松林16個(gè))的26份土樣中分離到金龜子綠僵菌，占采集樣區(qū)數(shù)的19．1％和樣品數(shù)的7．9％，土壤成菌落數(shù)(CFU)500．7

2、2500CFU·g一，表明金龜子綠僵菌在森林土壤中有較為廣泛的分布。對(duì)國(guó)內(nèi)外20株分離自不同寄主的金龜子綠僵菌菌株的產(chǎn)孢情況、孢子萌發(fā)率進(jìn)行了研究。在此基礎(chǔ)上，采用幼蟲(3～4齡)浸漬法(1x107孢子·mL4)和成蟲跗節(jié)接種法測(cè)定對(duì)松墨天牛的致病力。結(jié)果不同菌株間產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率和致病力存在顯著差異，Ma邢t．04、MaYTTR-03、MaZPTR．01、MaJGSTR-01、JPMal291、JPMal349、JPMa2049等7個(gè)菌株表現(xiàn)較為優(yōu)良；尤其是MaYTTR．04、MaYTrR-03、JPMa20

3、49等3個(gè)菌株的綜合性狀最好，產(chǎn)孢量分別為(2．18士o．12)x108、(1．25i-0．05)x108、(8．92：L0．16)x107孢子·cnl五；對(duì)幼蟲死亡的高峰期在15～18d，在接種后21d僵蟲率分別為80．0％、76．0％和93．1％；3個(gè)菌株對(duì)成蟲的死亡高峰期在12～15d，接種后21d校正死亡率分別達(dá)93．3％(1．2x106士2．0x105孢子／成蟲)、86．7％(1．5×106+5．0x105孢子／成蟲)和94．4％(3．4x106+3．24x105孢子，成蟲)，僵蟲率分別達(dá)83．4％、8

4、8．9％和75．O％，其中Ⅱ級(jí)僵蟲(孢子覆蓋蟲體50％以上)分別為66．7％、55．6％和53．1％。MdY兀R-04菌株在25+1℃恒溫條件下，接種量為2．3x106士0．2x106孢子／成蟲、2．3x105i-0．2x105孢子，成蟲的情況下時(shí)間效應(yīng)指標(biāo)值U’50分別為14．7d和18．5d；而室溫條件下(25℃～32℃)，這兩個(gè)劑量相應(yīng)的LTso分別為12．9d和17．9d，表明該菌在較高的變溫環(huán)境下仍具有較強(qiáng)致病力。林間套籠21d成蟲平均死亡率為60％，僵蟲率為48．9％。將JPMal349、JPMa20

5、49金龜子綠僵菌孢子置于馬尾松樹干表皮不同方位；將JPl349、JP2049、MaZPTR．01菌株孢子與土粉混合后埋入馬尾松純林、馬尾松與木荷混交林和馬尾松純林林窗等不同林分結(jié)構(gòu)的土壤中；將MaYTFR-04菌株感染的松墨天牛成蟲僵蟲置于馬尾松與木荷混交林土壤表面；研究金龜子綠僵菌在森林生態(tài)系統(tǒng)中的宿存動(dòng)態(tài)。JPMal349、JPMa2049菌株在樹干上的孢子，至168d仍有70％以上的萌發(fā)率(拐點(diǎn)萌發(fā)率，2005年1月31日～7月18日)；同一菌株在不同方位的萌發(fā)率存在一定差異，偏東方向保持拐點(diǎn)萌發(fā)率時(shí)間較長(zhǎng)

6、，JPMal349、JPMa2049菌株分別為196d、168d；偏西方向則較短，分別為163d、147d。兩個(gè)菌株70％以上萌發(fā)率平均拐點(diǎn)天數(shù)分別為166d和157d，差異不顯著。試驗(yàn)前期萌發(fā)率較為整齊，標(biāo)準(zhǔn)差大多在10％以下，后期不同處理位點(diǎn)的萌發(fā)率差異較大。氣溫是影響孢子萌發(fā)的主要因子之一，樹干表皮孢子萌發(fā)率隨著溫度升高而下降，萌發(fā)率急速下降產(chǎn)生拐點(diǎn)的日期從5月開始，6～7月份下降最快，月平均溫度28℃左右是孢子萌發(fā)率下降的一個(gè)明顯拐點(diǎn)。綠僵菌和白僵菌在樹干上宿存萌發(fā)率的趨勢(shì)是一致的，同一時(shí)間段萌發(fā)率不存在

7、顯著差異。在試驗(yàn)地土表平均含孢量2．01x108孢子／成蟲的松墨天牛成蟲僵蟲，經(jīng)28d孢子量減少了2．14倍，至42d平均含孢量保持在7．01x107孢子／成蟲，到84d后含孢量降低到5．02x106孢子／成蟲水平，與成蟲跗節(jié)粘取孢子量(接種量)是同一數(shù)量級(jí)。在林間126d內(nèi)，各僵蟲體上的孢子萌發(fā)率雖然存在顯著差異，但平均萌發(fā)率均保持在90％以上；僵蟲體上的孢子在接種濃度x106孢子·mLl數(shù)量級(jí)情況下，接種松墨天牛幼蟲后的校正死亡率仍有45．6％。研究了JPMal349、MaZPTR一01菌株在不同林分土壤中的

8、萌發(fā)率，結(jié)果表明參試的菌株都一直保持在70％以上的較高水平。孢子在土壤中經(jīng)29d，數(shù)量分別下降到初始的27．8％和51．4％，在323d內(nèi)保持在107孢子·g-1土壤以上水平，在211d內(nèi)對(duì)松墨天牛幼蟲致死率和僵蟲率分別仍保持在55％和45％以上。昆蟲病原菌自動(dòng)攜播器己獲實(shí)用新型專利(專利號(hào)：ZL200520095343．7)。本實(shí)用新型屬于一種昆蟲病原菌自動(dòng)攜播裝置，它