高效液相測(cè)茶多酚

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1、高效液相色譜法測(cè)定茶葉中的茶多酚摘要：本文采用高效液相法，應(yīng)用L-3000高效液相色譜系統(tǒng)建立了茶葉提取物中茶多酚的分析分離方法，取得了理想的分離效果。實(shí)驗(yàn)證明該方法前處理簡(jiǎn)便，分析結(jié)果準(zhǔn)確度高，精密度好，非常適合用于測(cè)定綠茶提取物中的茶多酚。一、引言茶多酚是一類存在于茶樹中的多羥基酚類化合物的簡(jiǎn)稱，尤以茶葉中含量最高，干茶葉中含茶多酚在30%左右。茶多酚主要包括兒茶素類（黃烷酮類），黃酮，黃酮醇類，花青素類，花白素類和酚酸及縮酚酸類。其中兒茶素類是茶多酚的主體組分，約占茶多酚總量的90%左右。茶多酚是茶葉中最具生物活性的成份，尤其其中的主要組分兒茶素。研究證實(shí)

2、兒茶素具有良好的抗氧化能力，同時(shí)具有抗腫瘤，抗誘變，預(yù)防齲齒等功效。因此兒茶素日益受到人們重視，成為一類重要的食品添加劑和藥物成分。在茶多酚的色譜分析方法中，反相HPLC法是目前普遍使用，技術(shù)最為成熟的方法。本文應(yīng)用北京普源精儀科技有限責(zé)任公司自主研發(fā)的RIGOLL-3000高效液相色譜儀建立了綠茶提取物中茶多酚的分離分析方法。實(shí)驗(yàn)證明該方法分離效果好，分析準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好。同時(shí)，RIGOLL-3000高效液相色譜儀非常適用于綠茶提取物中茶多酚的分離分析工作。二、實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器及試劑高效液相色譜儀：RIGOLL-3000高效液相色譜系統(tǒng)（配L-3300自動(dòng)

3、進(jìn)樣器）（北京普源精儀科技有限責(zé)任公司）；超純水純化系統(tǒng)：milli-Q（美國(guó)Millipore）；天平：BT124S（德國(guó)塞多利斯）；粉碎機(jī):天津泰斯特FW80；酸度計(jì)：PHSJ-4A(上海雷磁)；移液槍：10-100μl，100-1,000μl(eppendorf)；綠茶提取物：某天然產(chǎn)物公司；其余試劑均為市售HPLC級(jí)或分析純。2.2色譜條件色譜柱:Rigol：Compass,C18,5μm，4.6x250mmid，柱溫：35℃；進(jìn)樣量:10μL；流動(dòng)相：A：乙腈：水：TFA溶液B：乙腈：水溶液，采用梯度洗脫梯度方法：時(shí)間(min)A%B%01000201

4、00--250--7525257525.11000301000流速:1.0ml/min檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm2.3試樣準(zhǔn)備2.3.1樣品溶液的制備精密稱取綠茶提取物（從綠茶中經(jīng)過一系列工業(yè)提取純化制得）約23mg，置于10ml容量瓶中，加80%乙醇溶解，超聲提取20min，加80%乙醇定容，以0.45μm微孔濾膜濾過，濾液作為樣品供試液備用。2.4實(shí)驗(yàn)方法2.4.1樣品測(cè)試在選定的色譜條件下以樣品供試液進(jìn)樣，進(jìn)樣量10μl。三、結(jié)果及討論3.1樣品的分離圖1綠茶提取物樣品的色譜分離圖1-EGC;2-CAF;3–DL-C;4-EC;5-EGCG;6–GCG;7-EC

5、G3.2精密度實(shí)驗(yàn)取茶葉提取物供試溶液連續(xù)進(jìn)樣6次,進(jìn)樣量10ul。根據(jù)測(cè)定結(jié)果,計(jì)算保留時(shí)間及峰面積的RSD（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差），得到如下結(jié)果：圖2樣品重復(fù)性實(shí)驗(yàn)譜圖表1精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果化合物定性重復(fù)性RSD%定量重復(fù)性RSD%EGC0.22130.5687CAF0.18990.8121DL-C0.23540.7847EC;0.61011.2534EGCG0.27140.9165GCG0.31121.0211ECG0.24150.8741以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果該方法可將綠茶提取物中茶多酚的多種成分分離開，定性定量重復(fù)性好。3.3流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，茶葉成分的

6、分析多采用梯度洗脫，其調(diào)節(jié)酸堿度的試劑多種多樣，可以用醋酸、磷酸、DMF、TFA等，分析時(shí)間從10幾分鐘到1個(gè)小時(shí)不等。本實(shí)驗(yàn)先采用磷酸鹽做流動(dòng)相分析，出峰少且峰型不理想，后改用TFA，得到的峰型對(duì)稱性比較好。此外，文獻(xiàn)采用的梯度方法是A相在17分鐘內(nèi)由100%變化到25%，采用這一方法實(shí)際的結(jié)果顯示，DL-C和EC分離效果不理想，調(diào)整了梯度方法后，這一問題得到了解決。四、結(jié)論應(yīng)用RIGOLL-3000高效液相色譜儀，采用本文的方法進(jìn)行綠茶提取物中茶多酚活性物質(zhì)的分離分析實(shí)驗(yàn)，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。該儀器與方法結(jié)合，可充分滿足綠茶提取物產(chǎn)品質(zhì)量控制的實(shí)驗(yàn)要求。