血紅蛋白的測定方法

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1、血紅蛋白的測定方法血紅蛋白是一種色素蛋白，可以用比色法測定。血液中血紅蛋白以各種形式存在，包括氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白或其他衍生物。1）氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法：血液中除了SHb以外，其他各種血紅蛋白均可被試劑轉(zhuǎn)化、生成HiCN，其最大的吸收峰為540nm波長，可經(jīng)比色測定。此法為國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）推薦的國際標(biāo)準(zhǔn)參考方法，操作簡單，顯色快且結(jié)果穩(wěn)定醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理；但本法試劑中KCN有劇毒，測定過程中高白細(xì)胞和高球蛋白血癥易致混濁，HbCO轉(zhuǎn)化較慢。2）十二烷基月桂酰硫酸鈉血紅蛋白（SLS-Hb）法：除SH

2、b外，血液中各種Hb均可與低濃度十二烷基月桂酰硫酸鈉（SLS）作用，生成SLS-Hb棕紅色化合物。SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm，肩峰560nm.由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認(rèn)，因此不能用吸光度“A”值直接計算血紅蛋白濃度。本法操作簡單，呈色穩(wěn)定，準(zhǔn)確性和精確性符合要求，且無公害。但SDS質(zhì)量差異較大，并且SDS可破壞白細(xì)胞，不適合進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)的血液分析儀使用。3）疊氮高鐵血紅蛋白（HiN3）測定法：與HiCN法相似，但仍然有公害問題。4）堿羥血紅蛋白（AHD575nm）測定法：試劑簡單、不含有毒試劑、呈色穩(wěn)定，但由于其吸收峰在57

3、5nm，限制了此法在血液分析儀的使用。5）溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血紅蛋白測定法：該法試劑溶血性強(qiáng)又不破壞白細(xì)胞，可同時進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)，可用于血細(xì)胞分析儀自動檢測Hb和白細(xì)胞。缺點(diǎn)是對Hb測定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度較低。近年來，多參數(shù)血細(xì)胞分析儀的應(yīng)用，使Hb測定逐步以儀器法取代手工法，其優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、快速，同時可以獲得多項(xiàng)紅細(xì)胞的參數(shù)，血液分析儀法測定血紅蛋白的原理與手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型號儀器使用的溶血劑不同，形成Hb的衍生物不同醫(yī)`學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。某些溶血劑形成的衍生物穩(wěn)定性較差，因此要嚴(yán)格控制溶血劑加入量及溶血時間

4、，特別是半自動血細(xì)胞分析儀應(yīng)嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件。有些溶血劑內(nèi)雖加入了KCN，但其衍生物并非是HiCN，儀器要經(jīng)過HiCN標(biāo)準(zhǔn)液校正后，才能進(jìn)行Hb測定。儀器法測定血紅蛋白精確度CV約為1%.　　分為生理性或病理性增高和減低?！　?．生理性增高：住在高原地區(qū)的居民其紅細(xì)胞和血紅蛋白往往高于平原地區(qū)的居民。飲水過少或出汗過多，排除水分過多可導(dǎo)致暫時性的血液濃縮，造成紅細(xì)胞和血紅蛋白輕度升高。新生兒則為生理性增高?！　?．生理性減低：嬰兒從出生3個月起到15歲以前的兒童，因身體發(fā)育較快，造成紅細(xì)胞和血紅蛋白相對生成不足，因而出現(xiàn)相對的減低，可能比正常成人低約1

5、0%～20%.孕婦在妊娠的中后期因血漿容量增加，導(dǎo)致血液被稀釋；老年人因?yàn)楣撬柙煅獧C(jī)能減低，可能導(dǎo)致紅細(xì)胞和血紅蛋白的減少，也稱為生理性貧血，此時需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)與治療，并不意味著患有貧血性疾病或疾病導(dǎo)致的貧血?！　?．病理性升高：　?。?）嚴(yán)重嘔吐，腹瀉，大量出汗，大面積燒傷病人，尿崩癥，甲狀腺功能亢進(jìn)危象，糖尿病酸中毒等，由于血漿中水分丟失過多，導(dǎo)致血液濃縮，會出現(xiàn)紅細(xì)胞和血紅蛋白量的明顯增加?！　。?）慢性心臟病、肺源性心臟病、子紺型先天性心臟病等因?yàn)榻M織缺氧，血液中促紅細(xì)胞生成素增多而使血液中紅細(xì)胞和血紅蛋白量呈代償性增加。　?。?）某些腫瘤

6、，如腎癌，肝細(xì)胞癌，子宮肌瘤，卵巢癌，腎胚胎癌等也可使促紅細(xì)胞生成素呈非代償性增加，導(dǎo)致上述的結(jié)果?！　。?）真性紅細(xì)胞增多癥是一種原因不明的以紅細(xì)胞增多為主的血液疾病?！　?．病理性減低：　?。?）骨髓造血功能障礙，如再生障礙性貧血、白血病、骨髓瘤、骨髓纖維化引起的貧血?！　。?）慢性疾病，如感染、炎癥、惡性腫瘤、尿毒癥、肝病、風(fēng)濕性疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病等造成或伴發(fā)的貧血。　?。?）造血物質(zhì)缺乏或利用障礙造成的貧血，如缺鐵性貧血，鐵粒幼細(xì)胞性貧血，巨幼細(xì)胞性貧血。　　（4）紅細(xì)胞破壞過多造成的貧血：如溶血性貧血、地中海貧血、異常血紅蛋白病、陣發(fā)性睡眠

7、性血紅蛋白尿癥、免疫性溶血、機(jī)械性溶血等。　?。?）急性失血，大手術(shù)后，慢性失血等都是造成紅細(xì)胞和血紅蛋白降低的因素。