現(xiàn)代生物技術(shù)在水產(chǎn)動物健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用

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1、第31卷　第3期河南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)Vol.31No.32003年8月JournalofHenanNormalUniversity(NaturalScience)Aug.2003　　文章編號:1000-2367(2003)03-0066-06X現(xiàn)代生物技術(shù)在水產(chǎn)動物健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用1,211孔祥會,王桂忠,李少菁(1.廈門大學(xué)海洋學(xué)系亞熱帶海洋研究所,福建廈門361005;2.河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453002)摘　要:現(xiàn)代生物技術(shù)的應(yīng)用對水產(chǎn)動物健康養(yǎng)殖產(chǎn)生了很大的影響.本文從水產(chǎn)動物疾病診斷,高效疫苗制備,抗病品種培育,提高抗病力

2、,水體污染監(jiān)測等方面對現(xiàn)代生物技術(shù)的應(yīng)用進行了綜述.旨在為水產(chǎn)動物健康養(yǎng)殖及相關(guān)研究提供參考.關(guān)鍵詞:現(xiàn)代生物技術(shù);水產(chǎn)動物;健康養(yǎng)殖;應(yīng)用中圖分類號:Q789文獻標(biāo)識碼:A隨著人們生活水平的提高,對水產(chǎn)品的需求已經(jīng)從數(shù)量型轉(zhuǎn)向質(zhì)量型,優(yōu)質(zhì)健康的水產(chǎn)品日益得到人們的青睞.優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)是今后漁業(yè)的發(fā)展方向.無病無傷,體色鮮艷的健康水產(chǎn)品才能滿足市場的需求.傳統(tǒng)的養(yǎng)殖模式由于水產(chǎn)動物發(fā)病時大量使用氯制劑、硫酸銅和孔雀石綠等藥物,結(jié)果由于殘毒影響,很難生產(chǎn)出健康的水產(chǎn)品.近幾年來現(xiàn)代生物技術(shù)在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上的運用和發(fā)展為水產(chǎn)動物的健康養(yǎng)殖揭開了新的篇章.1　水產(chǎn)動物微

3、生物病原體的檢測分子生物學(xué)方法出現(xiàn)之前,水產(chǎn)動物微生物疾病的診斷主要依賴于組織細胞培養(yǎng),病原體表型鑒定,血清學(xué)分析或組織病理學(xué)檢查.微生物疾病病原體鑒定過程復(fù)雜,耗費時間較長.而其發(fā)生和傳播又非?？?往往由于不能現(xiàn)場鑒定和及時治療,造成經(jīng)濟重大損失.分子生物學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)為微生物病原體的鑒定提[1,2]供了直接的方法,簡化了診斷的時程,使水產(chǎn)動物疾病診斷發(fā)生了根本性的變革.分子生物學(xué)診斷在檢測病原體方面之所以具有獨到的優(yōu)越性,是因為它檢測靈敏度較高,不需要體外培養(yǎng).通過檢測遺傳多態(tài)性或者基因突變來確定和鑒別病原,多態(tài)性鑒別靈敏度較高,不同種類和品系的單個核苷

4、酸插入,刪除,突變均可檢測.目前在水產(chǎn)動物病原體診斷上常用的分子生物學(xué)方法有限制性酶切,探針雜交和PCR等.1.1　限制性酶切(Restrictionenzymedigestion)檢測限制性酶可識別DNA上較短的序列,在識別位點上切開DNA,單個核苷酸變化即可導(dǎo)致限制性酶切位點的增加或缺失,因此,酶切后產(chǎn)生的片段數(shù)目發(fā)生了改變,即所謂的限制性片段長度多態(tài)性(Restrictionlengthpolymorphisms,RFLP).然后進行凝膠電泳,酶切后的DNA片段根據(jù)大小在凝膠電泳上進行分離,染色后即可觀察各個不同的片段,進行遺傳變異的分析.不同樣品總

5、DNA酶切后即可產(chǎn)生限制性酶切多態(tài)[3,4]性.然而檢測這些多態(tài)性差異時,需要使用標(biāo)記的DNA探針來加以確定.另一種方法可以不需要DNA探針雜交,首先對DNA片段進行限制性酶切,然后靶定DNA特定片段,通過PCR擴增,來顯示限制性片X收稿日期:2002-12-18資金項目:國家863重大專項(2002AA603013)作者簡介:孔祥會(1968～),男,河南虞城人,河南師范大學(xué)講師,廈門大學(xué)博士生.主要研究方向為水生動物生理生化及健康養(yǎng)殖.第3期　　　　　　　　　　　孔祥會等:現(xiàn)代生物技術(shù)在水產(chǎn)動物健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用67[5,6]段多態(tài)性,即所謂的擴增片段長

6、度多態(tài)性(Amplificationfragmentlengthpolymorphisms,AFLP).對病[3,4,5,6][7,8]原微生物而言,這種診斷是相當(dāng)有用而直接的方法.也可以鑒別特定的寄生蟲.Chang,Y.S.etal(2001)從美國三個不同的海岸水體(NewYork,NewJersey,andTexas)收集的藍蟹(Callinectessapidus),通過PCR和原位雜交分析兩步診斷證實存在白斑綜合癥病毒(whitespotsyndromevirus,WSSV).通過RFLP方法,對于一個1156bp片段的WSSVrrl-speci

7、ficRsaI進行擴增,從而區(qū)別NewJersey[9]藍蟹WSSV和其它地方分離的WSSV.1.2　探針雜交(Probes,Hybridisation)檢測特異性的核酸探針雜交是鑒定病原體十分有效的方法,探針可用來檢測和確定病原體特定序列,甚至被其它核苷酸片段污染的樣品也可檢測.然而探針的設(shè)計及雜交的條件要求嚴(yán)格,主要目的是確保探針和樣品中互補核酸序列特異性結(jié)合.關(guān)于核酸探針的標(biāo)記和檢測系統(tǒng)的多樣性,Tijssen,P.(1993)進行了綜[10][11][12]述.目前常用的標(biāo)記有半抗原諸如生物素或地高辛和熒光標(biāo)記.標(biāo)記和檢測方法多樣性能夠提供適宜的系

8、統(tǒng)進行點印跡或原位雜交.限制性酶切之后,可以用探針來確定和檢測片段