GBT18980-2003 乳和乳粉中黃曲霉毒素M1的測(cè)定-免疫親和層析凈化高效液相色譜法.pdf

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1、ICS67.100.10X04GB/T18980-2003乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的測(cè)定免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法DeterminationofaflatoxinM1contentinmilkandmilkpowder-Cleanupbyimmunoaffinitychromatogaphyanddeterminationbyhigh-performanceliquidchromatigraphyandfluorometer(ISO14501:1998,IDT)2003-02-21發(fā)布2003-08-

2、01實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布GB/T18980-2003前言本標(biāo)準(zhǔn)的免疫親和層析凈化一高效液相色譜法等同采用ISO14501;1998《乳和乳粉中黃曲霉毒素M免疫親和層析凈化高效液相色譜法》。本標(biāo)準(zhǔn)免疫親和層析凈化一熒光光度法快速測(cè)定乳和乳粉中黃曲霉毒素M,o本標(biāo)準(zhǔn)中的附錄A為資料性附錄本標(biāo)準(zhǔn)由北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)食品工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:北京市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所、青島出人境檢驗(yàn)檢疫局、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:王晶、張鵬、張藝兵、邵明武。本標(biāo)

3、準(zhǔn)為首次發(fā)布。GB/T18980-2003乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的測(cè)定免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法免疫親和層析凈化高效液相色譜法1.1范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于乳、乳粉,以及低脂乳、脫脂乳、低脂乳粉和脫脂乳粉中黃曲霉毒素M,含量的測(cè)定。乳粉中的最低檢測(cè)限是。.08pg/kg,乳中的最低檢測(cè)限是。.008pg/l1.2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。1.2.1黃曲碑毒索M,含,at7atoxinM,content通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)所測(cè)定出的本物質(zhì)的質(zhì)量含量。注:黃曲霉毒素M、的含量以微克/升伽g/L)或微克/千克(

4、fig/kg)表示。1.3原理試樣通過(guò)免疫親和柱時(shí),黃曲霉毒素M被提取。親和柱內(nèi)含有的黃曲霉毒素M、特異性單克隆抗體交聯(lián)在固體支持物上,當(dāng)樣品通過(guò)親和柱時(shí),抗體選擇性的與黃曲霉毒素M,(抗原)鍵合,形成抗體一抗原復(fù)合體。用水洗柱除去柱內(nèi)雜質(zhì),然后用洗脫劑洗脫吸附在柱上的黃曲霉毒素M,,收集洗脫液。用帶有熒光檢測(cè)器的高效液相色譜儀測(cè)定洗脫液中黃曲霉毒素M,含量1.4試荊除非特別聲明,所用試劑為分析純;使用蒸餾水、去離子水或其他相當(dāng)純度的水。1.4.1免疫親和柱:應(yīng)該含有黃曲霉毒素M的抗體。親和柱的最大容量不小于100n

5、g黃曲霉毒素M,(相當(dāng)于50ml濃度為2pg/l的試樣),當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液含有4ng黃曲霉毒素M,(相當(dāng)于50mL濃度為80ng/l的試樣)時(shí)回收率不低于80。應(yīng)該定期檢查親和柱的柱效和回收率,對(duì)于每個(gè)批次的親和柱至少檢查一次(見(jiàn)1.4.1.1和1.4.1.2)1.4.1.1柱效檢查用移液管(1.5.4)移取1.0m工_的黃曲霉毒素M,儲(chǔ)備液(1.4.5.2)到20mL的錐形試管中(1.5.9)。用恒流的氮?dú)?1.4.3)將液體慢慢吹干,然后用10ml.10%的乙睛(1.4.2.2)溶解殘?jiān)?,用力搖蕩。將該溶液加人到40m

6、L的水中,充分混勻,全部通過(guò)免疫親和柱。按說(shuō)明書(shū)要求使用免疫親和柱。淋洗免疫親和柱后,洗脫下黃曲霉毒素M,。將洗脫液進(jìn)行適當(dāng)稀釋后,用高效液相色譜儀測(cè)定免疫親和柱鍵合的黃曲霉毒素M,含量。計(jì)算黃曲霉毒素M,的回收率,將其結(jié)果與1.4.1中所要求的指標(biāo)進(jìn)行比較。1.4.1.2回收率檢查用移液管(1.5們移取。.8ml。005pg/ml的黃曲霉毒素Ml標(biāo)準(zhǔn)工作液(1.4.5.3)到10mL的水中,充分混勻,全部通過(guò)免疫親和柱。按說(shuō)明書(shū)使用免疫親和柱。淋洗免疫親和柱,洗脫下黃曲霉毒素M:。將洗脫液進(jìn)行適當(dāng)稀釋后,用高效液相

7、色譜儀測(cè)定免疫親和柱鍵合的黃曲霉毒素M,含量。計(jì)GB/T18980-2003算黃曲霉毒素M,的回收率,將其結(jié)果與1.4.1中所要求的指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比。1.4.2乙睛:色譜級(jí)1.4.2.125%乙睛一水溶液:將250mL的乙睛(1.4.2)與750ml的水混溶(使用前需要脫氣)。1.4.2.210%乙睛一水溶液:將100mL的乙睛(1.4.2)與900mL的水混溶(使用前需要脫氣)。1.4.3氮?dú)狻?.4.4三抓甲烷:加人。.5%^-1.0%質(zhì)量比(與三抓甲烷質(zhì)量比)的乙醇進(jìn)行穩(wěn)定。1.4.5黃曲霉毒素M:標(biāo)準(zhǔn)溶液1.4.

8、5.1校準(zhǔn)溶液黃曲霉毒素M:三抓甲烷溶液標(biāo)稱(chēng)濃度為10pg/mL。根據(jù)下面的方法,在最大吸收波段處測(cè)定溶液的吸光度,以確定黃曲霉毒素M,的實(shí)際濃度。用分光光度計(jì)(1.5.11)在340nm^-370nm處測(cè)定,扣除三抓甲烷的空白本底,讀取標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值。在接近360nm最大吸收波段A、二處,測(cè)得吸光度值為A,根據(jù)式(1)計(jì)算出濃度值c,(P

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