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《GBT18980-2003乳和乳粉中黃曲霉毒素M1的測定-免疫親和層析凈化高效液相色譜法.pdf》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、ICS67.100.10X04GB/T18980-2003乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的測定免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法DeterminationofaflatoxinM1contentinmilkandmilkpowder-Cleanupbyimmunoaffinitychromatogaphyanddeterminationbyhigh-performanceliquidchromatigraphyandfluorometer(ISO14501:1998,IDT)2003-02-21發(fā)布2003-08-0
2、1實施中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布GB/T18980-2003前言本標準的免疫親和層析凈化一高效液相色譜法等同采用ISO14501;1998《乳和乳粉中黃曲霉毒素M免疫親和層析凈化高效液相色譜法》。本標準免疫親和層析凈化一熒光光度法快速測定乳和乳粉中黃曲霉毒素M,o本標準中的附錄A為資料性附錄本標準由北京市質量技術監(jiān)督局提出。本標準由全國食品工業(yè)標準化技術委員會歸口。本標準起草單位:北京市產品質量監(jiān)督檢驗所、青島出人境檢驗檢疫局、國家標準物質研究中心。本標準主要起草人:王晶、張鵬、張藝兵、邵明武。本標準為
3、首次發(fā)布。GB/T18980-2003乳和乳粉中黃曲霉毒素M,的測定免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法免疫親和層析凈化高效液相色譜法1.1范圍本標準適用于乳、乳粉,以及低脂乳、脫脂乳、低脂乳粉和脫脂乳粉中黃曲霉毒素M,含量的測定。乳粉中的最低檢測限是。.08pg/kg,乳中的最低檢測限是。.008pg/l1.2術語和定義下列術語和定義適用于本標準。1.2.1黃曲碑毒索M,含,at7atoxinM,content通過本標準所測定出的本物質的質量含量。注:黃曲霉毒素M、的含量以微克/升伽g/L)或微克/千克(fig
4、/kg)表示。1.3原理試樣通過免疫親和柱時,黃曲霉毒素M被提取。親和柱內含有的黃曲霉毒素M、特異性單克隆抗體交聯(lián)在固體支持物上,當樣品通過親和柱時,抗體選擇性的與黃曲霉毒素M,(抗原)鍵合,形成抗體一抗原復合體。用水洗柱除去柱內雜質,然后用洗脫劑洗脫吸附在柱上的黃曲霉毒素M,,收集洗脫液。用帶有熒光檢測器的高效液相色譜儀測定洗脫液中黃曲霉毒素M,含量1.4試荊除非特別聲明,所用試劑為分析純;使用蒸餾水、去離子水或其他相當純度的水。1.4.1免疫親和柱:應該含有黃曲霉毒素M的抗體。親和柱的最大容量不小于100ng黃曲霉
5、毒素M,(相當于50ml濃度為2pg/l的試樣),當標準溶液含有4ng黃曲霉毒素M,(相當于50mL濃度為80ng/l的試樣)時回收率不低于80。應該定期檢查親和柱的柱效和回收率,對于每個批次的親和柱至少檢查一次(見1.4.1.1和1.4.1.2)1.4.1.1柱效檢查用移液管(1.5.4)移取1.0m工_的黃曲霉毒素M,儲備液(1.4.5.2)到20mL的錐形試管中(1.5.9)。用恒流的氮氣(1.4.3)將液體慢慢吹干,然后用10ml.10%的乙睛(1.4.2.2)溶解殘渣,用力搖蕩。將該溶液加人到40mL的水中,
6、充分混勻,全部通過免疫親和柱。按說明書要求使用免疫親和柱。淋洗免疫親和柱后,洗脫下黃曲霉毒素M,。將洗脫液進行適當稀釋后,用高效液相色譜儀測定免疫親和柱鍵合的黃曲霉毒素M,含量。計算黃曲霉毒素M,的回收率,將其結果與1.4.1中所要求的指標進行比較。1.4.1.2回收率檢查用移液管(1.5們移取。.8ml。005pg/ml的黃曲霉毒素Ml標準工作液(1.4.5.3)到10mL的水中,充分混勻,全部通過免疫親和柱。按說明書使用免疫親和柱。淋洗免疫親和柱,洗脫下黃曲霉毒素M:。將洗脫液進行適當稀釋后,用高效液相色譜儀測定免
7、疫親和柱鍵合的黃曲霉毒素M,含量。計GB/T18980-2003算黃曲霉毒素M,的回收率,將其結果與1.4.1中所要求的指標進行對比。1.4.2乙睛:色譜級1.4.2.125%乙睛一水溶液:將250mL的乙睛(1.4.2)與750ml的水混溶(使用前需要脫氣)。1.4.2.210%乙睛一水溶液:將100mL的乙睛(1.4.2)與900mL的水混溶(使用前需要脫氣)。1.4.3氮氣。1.4.4三抓甲烷:加人。.5%^-1.0%質量比(與三抓甲烷質量比)的乙醇進行穩(wěn)定。1.4.5黃曲霉毒素M:標準溶液1.4.5.1校準溶液
8、黃曲霉毒素M:三抓甲烷溶液標稱濃度為10pg/mL。根據(jù)下面的方法,在最大吸收波段處測定溶液的吸光度,以確定黃曲霉毒素M,的實際濃度。用分光光度計(1.5.11)在340nm^-370nm處測定,扣除三抓甲烷的空白本底,讀取標準溶液的吸光度值。在接近360nm最大吸收波段A、二處,測得吸光度值為A,根據(jù)式(1)計算出濃度值c,(P