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1、蛋白質(zhì)分離純化方法的研究進展摘耍：蛋白質(zhì)是一類最重要的生物人分子，在生物體內(nèi)占育重要的地位，是生物功能的載體。蛋白質(zhì)的分離純化是蛋口質(zhì)研究中必不可少的一個環(huán)節(jié)，木文根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)特點，主要針對近幾年蛋白質(zhì)分離純化的方法做了一個綜述。關(guān)鍵詞：蛋白質(zhì)；分離；純化；展望；ProteinseparationandpurificationmethodsofresearchLUZhongying*,YAOyuanyong,CHENShixuc,XingMingming,XIEYong,(InstituteofMaterialandChemicalEngineer
2、ing,TongrenUniversity,TongrenGuizhou554300)Abstract:Proteinisoneofthemostimportantclassofbiologicalmacromoleculesinvivoplaysanimportantrole,isthebiologicalfunctionofthecarrier.Proteinseparationandpurificationofproteinsisanessentialpartofthestudy,thispaperbasedonthenatureofthepro
3、teincharacteristics,inrecentyears,mainlyforproteinseparationandpurificationmethodstodoareview.Keywords:protein;separation;purification;Outlook蛋白質(zhì)在牛物體的牛命活動的過程中發(fā)揮著重要作用，他參與了催化代謝反應(yīng)、物質(zhì)運轉(zhuǎn)、興奮的傳導(dǎo)、生長與發(fā)育的調(diào)控等。蛋白質(zhì)廣泛存在于動植物體系屮，大多數(shù)的蛋白質(zhì)在動植物細(xì)胞內(nèi)的含量極低。欲將蛋門質(zhì)從生物體系中提取分離出來，同時保證蛋門質(zhì)組成成分、結(jié)構(gòu)性質(zhì)和生物活性均不變，目前還
4、存在較大的難度。本文根據(jù)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)特點，主要針對近兒年蛋白質(zhì)分離純化的方法做了一個綜述。1蛋白質(zhì)分離純化的材料選擇和預(yù)處理以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點和功能為基礎(chǔ),在實際操作屮，根據(jù)所分離純化原材料性質(zhì)差異,而采取不同方法進行預(yù)處理。對于材料的選擇，微生物、動物和植物都可做為制備蛋門質(zhì)的原材料，對于微生物，應(yīng)重點觀察生長期，主要原I大1為處于對數(shù)生長期的微生物，具屮含量較高的時酶和核酸，可以獲得高產(chǎn)量。動物材料必要對結(jié)締組織和脂肪組織進行處理除去，植物材料除要經(jīng)過去殼、脫脂的同時，對其細(xì)胞壁也要進行破碎，細(xì)菌的細(xì)胞壁可以選収不同方法對其破碎。破碎法日前較常
5、用超聲波振蕩、研磨、高壓擠壓或酶處理等方法。2蛋門質(zhì)分離純化方法2.1粗提2.1.1沉淀法2.1.1.1鹽析沉淀法鹽析沉淀法將不同蛋白質(zhì)加入一定濃度的鹽溶液中，根據(jù)其溶解度降低程度的壽別，從而達(dá)到彼此分離的方法，是蛋門質(zhì)和酶提純工藝中最早釆用，到現(xiàn)在仍廣泛應(yīng)用的此方法。蛋門質(zhì)分子表面親水基【才I越多，水化層越厚。章亮［1］采用鹽析法提取羔羊皺胃酶的條件進行研究，系統(tǒng)分析了不同因素對鹽析效果的影響。2.1.1.2等電點沉淀等電點沉淀英原理是利用不同的蛋白質(zhì)其等電點不同來分離蛋白質(zhì)。王發(fā)祥等［2］提岀了-?種以等電點沉淀方法純化蘇云金桿菌CrylAc蛋白的
6、原毒素，再用分子篩層析純化其活性毒素的方法。2.1.13有機溶劑沉淀法有機溶劑沉淀法是向蛋門質(zhì)等生物大分了的水溶液中加入多倍右機溶劑，從而使蛋門質(zhì)分子的溶解度顯著降低，使其沉淀析HloLee等［3］用99%乙醇桅子果實浸漬數(shù)月，提収片并經(jīng)硅膠柱層析，最后獲得英中的糖蛋口。2.1.2離心2.1.2.1差速離心法差速離心法英原理是通過不斷增加相対離心力，人小不同的顆粒沉降速度差界，通過離心速度和時間不同進行多次離心，從I何達(dá)到分離。茅速離心法的優(yōu)點是樣品的處理暈較大，可用于大量樣品的初分離。其缺點是分離復(fù)雜樣品和要求分離純度較高時,離心次數(shù)多，操作繁雜。由
7、于沉淀的多次清洗、溶解、再沉淀，容易引起中間損失，所以離心分辨力差。2.1.2.2密度梯度離心密度梯度離心法又稱為區(qū)帶離心法。此法可以使樣品屮幾個或全部組分分離,具有良好的分辨率。魏穎娟籌［4］采用兩步蔗糖密度梯度離心法純化質(zhì)膜，結(jié)合雙水相和蔗糖密度梯度離心作為兩種不同的提取及純化質(zhì)膜的方法，可以進一步純化質(zhì)膜得到更好的分離效果。2.2精提2.2.1層析(chromatography)221.1離子交換柱層析離子交換層析是以離子交換劑為柱填充物，在中性條件下，依據(jù)流動和屮的組分離了與交換劑上的平衡離子可逆交換時結(jié)合力大小的差別而進行分離的一種展析方法。
8、近兒年親和層析在基因工程亞單位疫苗的分離純化的應(yīng)用屮具有廣泛性。羅輕蕾等［6］采用硫酸錢沉淀和
