淋巴細(xì)胞亞群分析

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1、淋巴細(xì)胞亞群分析（一）雙色分析方案CD45-FITC/CD14-PE;CD3-TC-CD4-PE-CD8-FITC;CD3-FITC/CD（l6+56）-PE;CD19-TC;Cal-Lyse;ControlIgG2a-FPTo結(jié)果見表2-3-1o（二）三色分析方案表2-3-1雙色法檢測外周血T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞試劑組合管號FITCPE應(yīng)用12345CD45CD3CD3CD3CD3CD14CD19CD4CD8CD16和CD56光散射坐標(biāo)設(shè)門總T和B淋巴細(xì)胞總T和CD4陽性T淋巴細(xì)胞總T和CD8陽性T淋巴細(xì)胞總T和NK細(xì)胞A管：CD45/CD14確定FSC/S

2、SC中淋巴細(xì)胞“門”位置，對于自配溶血劑用戶必做此質(zhì)控管。B管：陰性對照管，用來設(shè)置各PMT電壓和陰性區(qū)域。C管：CD3/CD4/CD8三色檢測管，調(diào)節(jié)熒光補(bǔ)償之用。D管：CD3/CD(16+56)/CD19三色檢測管。結(jié)果見表2-3-2o表2?3?2三色法檢測外周血T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞的試劑組合管號FITCPE應(yīng)用123CD45CD8CD3CD14CD4CD16和CD56光散射坐標(biāo)設(shè)“門”總T細(xì)胞及其亞群NK細(xì)胞及B細(xì)胞CD45和CD14在口細(xì)胞上有著不同的表達(dá)。它們可以用來在光散射坐標(biāo)上區(qū)分淋巴細(xì)胞群體或其他細(xì)胞。一個適合的分型方案應(yīng)能夠提供最精確的方法

3、，明確地區(qū)分出各類細(xì)胞群。方案中所選抗體應(yīng)能夠最大限度地反映出整個標(biāo)本中細(xì)胞的信息，提供樣本管Z間的對比質(zhì)控來作陽性標(biāo)本熒光強(qiáng)度對照。美國疾病控制中心(CDC)制定了一套檢測T淋巴細(xì)胞亞群的方案，可作為參照來檢測樣木。(三)應(yīng)用CD3/CD19區(qū)分T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞在多色免疫分型的細(xì)胞分型中，陰性細(xì)胞群體不僅用來區(qū)分陽性細(xì)胞群體，它還可以從雙陽性細(xì)胞屮區(qū)分出單陽性細(xì)胞。有鑒于此，簡單的同型對照細(xì)胞并不能完全作為設(shè)定熒光陽性界線的參考細(xì)胞群。在CDC推薦的淋巴細(xì)胞分型方案中，對照細(xì)胞群體運(yùn)用的是相互沒有交叉的T、B淋巴細(xì)胞。(1)CD3是T細(xì)胞特異性抗原，CD

4、19則可用來識別B細(xì)胞。如運(yùn)用CD3/CD19雙標(biāo)試劑，應(yīng)沒有CD3和CD19雙陽性細(xì)胞群體存在。因此，當(dāng)運(yùn)用CD3/CD19雙染色時，只會出現(xiàn)單陽性細(xì)胞，通過此管可設(shè)定機(jī)器設(shè)置，為后續(xù)要觀察雙陽性細(xì)胞的檢測管作對照。(2)CD3、CD19陽性表達(dá)為獨(dú)立的陽性細(xì)胞群體。如出現(xiàn)雙陽性細(xì)胞均視為假象。這樣就可不用同型對照來設(shè)定陰性或陽性界線。其屮單陽性細(xì)胞群體提供了設(shè)定陽性界線的標(biāo)準(zhǔn)。此外，在CD3/CD19檢測時，還會有雙陰性細(xì)胞群體的存在，這些是NK細(xì)胞。這些細(xì)胞乂提供雙陰性群體的對照。有吋檢測吋會出現(xiàn)雙陽性細(xì)胞，這是由于T細(xì)胞和B細(xì)胞黏附時同時通過儀器的檢測區(qū)

5、而造成的雙陽性結(jié)果。(1)CD3/CD19不僅可用來設(shè)定標(biāo)木的熒光的陰性和陽性界線，它還可用來檢查儀器的補(bǔ)償設(shè)置和非特異性結(jié)合。在用這個組合進(jìn)行檢測時，會出現(xiàn)三群彼此獨(dú)立的細(xì)胞群，如細(xì)胞分群不清或位置發(fā)生偏差則要對樣本進(jìn)行仔細(xì)分析。(三)應(yīng)用CD3/CD4來鑒定CD4+T淋巴細(xì)胞如同其他許多單克隆抗體一樣，抗CD4抗體并不是完全只與輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)，它還會與單核細(xì)胞結(jié)合。因此，如要鑒別CD4+的輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞，則需要加入第二種抗體來區(qū)分輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞與單核細(xì)胞。⑴首先用CD3來區(qū)分全部T細(xì)胞。CD3/CD4雙陽性的細(xì)胞為真正的輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞

6、。這些細(xì)胞主要是HIV病毒感染對象。在HIV感染后，隨著疾病的發(fā)展出現(xiàn)免疫抑制后，這群細(xì)胞會明顯減少;在臨床中，對HIV的監(jiān)測主要依靠檢測這群細(xì)胞的數(shù)量。(2)CD3?/CD4+細(xì)胞群體是由單核細(xì)胞組成的。這些細(xì)胞和對于CD4+和T細(xì)胞來說弱表達(dá)CD4,在光散射參數(shù)的位置分布也較廣。CD3/CD4抗體組合能完全將CD4陽性輔助/誘導(dǎo)性T細(xì)胞與CD4陽性的單核細(xì)胞區(qū)分開來。因為CD4+T細(xì)胞能與單核細(xì)胞完全分離，故在光散射坐標(biāo)上設(shè)淋巴細(xì)胞“門”時，“門”可設(shè)得大一些，即使包含了單核細(xì)胞或其他細(xì)胞都不會影響檢測值。(3)此管也可檢測補(bǔ)償及非特異性結(jié)合情況°CD3+/

7、CD牛細(xì)胞群體應(yīng)明顯地與CD3/CD19中CD3+細(xì)胞群位置相重合。(三)應(yīng)用CD3/CD8鑒定CD8+T淋巴細(xì)胞CDS的表達(dá)不只限于細(xì)胞毒性/抑制性T細(xì)胞，這種抗原在部分NK細(xì)胞上也能檢測到，故CD8必須與CD3一起來鑒定細(xì)胞毒性/抑制性T細(xì)胞。(1)同時表達(dá)CD3/CD8的細(xì)胞群才是真正的CD8+T淋巴細(xì)胞，CD8的表達(dá)包括弱陽性和強(qiáng)陽性部分。CD8的表達(dá)經(jīng)常與陰性細(xì)胞群體相延續(xù)。因此，CD8陽性細(xì)胞檢測群依賴于儀器靈敏度，正確補(bǔ)償?shù)慕?，以及恰?dāng)?shù)卦O(shè)定陰性細(xì)胞群體。CD3-/CD84-細(xì)胞包括一部分NK細(xì)胞和少數(shù)粒細(xì)胞。這些細(xì)胞弱表達(dá)CD8+,由于缺少CD

8、3,易于與CD3+/CD