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1、還原糖和總糖的測定——3,5-二硝基水楊酸比色法一、材料、主要儀器和試劑1、材料小麥面粉；精密pH試紙。2、主要儀器（1）具塞玻璃刻度試管：20mL×11（2）大離心管：50mL×2（3）燒杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒溫水浴鍋（8）沸水?。?）離心機（10）分光光度計3、試劑（1）1mg/mL葡萄糖標準液準確稱取80℃烘至恒重的分析純葡萄糖100mg，置于小燒杯中，加少量蒸餾水溶解后，轉移到100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL，混勻，4℃冰箱
2、中保存?zhèn)溆?。?）3,5-二硝基水楊酸（DNS）試劑將6.3gDNS和262mL2MNaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容至1000mL，貯于棕色瓶中備用。（3）碘-碘化鉀溶液：稱取5g碘和10g碘化鉀，溶于100mL蒸餾水中。（4）酚酞指示劑：稱取0.1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。（5）6MHCl和6MNaOH各100mL。二、操作步驟1．制作葡萄糖標準曲線取7支20mL具塞刻度試管編號，按表1分別加入濃度為1mg/mL的葡萄糖標準液、蒸餾水和3,5-二硝基水楊
3、酸（DNS）試劑，配成不同葡萄糖含量的反應液。表1葡萄糖標準曲線制作管號1mg/mL葡萄糖標準液（mL）蒸餾水（mL）DNS（mL）葡萄糖含量（mg）光密度值（OD540nm）0021.5010.21.81.50.220.41.61.50.430.61.41.50.640.81.21.50.851.01.01.51.061.20.81.51.2將各管搖勻，在沸水浴中準確加熱5min，取出，冷卻至室溫，用蒸餾水定容至20mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計上進行比色。調波長540nm，用0號管調零點，測出1~6號管的光密度值。以光密度值為縱坐標，葡萄糖含量（
4、mg）為橫坐標，在坐標紙上繪出標準曲線。2．樣品中還原糖和總糖的測定（1）還原糖的提取準確稱取3.00g食用面粉，放入100mL燒杯中，先用少量蒸餾水調成糊狀，然后加入50mL蒸餾水，攪勻，置于50℃恒溫水浴中保溫20min，使還原糖浸出。將浸出液（含沉淀）轉移到50mL離心管中，于4000r/min下離心5min，沉淀可用20mL蒸餾水洗一次，再離心，將二次離心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測液。（2）總糖的水解和提取準確稱取1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加15mL蒸餾水及10mL6MHCl，置沸
5、水浴中加熱水解30min（水解是否完全可用碘-碘化鉀溶液檢查）。待三角瓶中的水解液冷卻后，加入1滴酚酞指示劑，用6mol/LNaOH中和至微紅色，用蒸餾水定容在100mL容量瓶中，混勻。將定容后的水解液過濾，取濾液10mL，移入另一100mL容量瓶中定容，混勻，作為總糖待測液。（3）顯色和比色取4支20mL具塞刻度試管，編號，按表2所示分別加入待測液和顯色劑，空白調零可使用制作標準曲線的0號管。加熱、定容和比色等其余操作與制作標準曲線相同。表2樣品還原糖測定管號還原糖待測液（mL）總糖待測液（mL）蒸餾水（mL）DNS（mL）光密度值（OD540nm）查
6、曲線葡萄糖量（mg）70.51.51.580.51.51.59111.51011三、結果與計算：計算出7、8號管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值，在標準曲線上分別查出相應的還原糖毫克數，按下式計算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。親愛的用戶：煙雨江南，畫屏如展。在那桃花盛開的地方，在這醉人芬芳的季節(jié)，愿你生活像春天一樣陽光，心情像桃花一樣美麗，感謝你的閱讀。1、最困難的事就是認識自己。21.7.287.28.202107:1507:15:31七月-2107:152、自知之明是最難得的知識。二〇二一年七月二十八日2021年7月28日星期三3、越是
7、無能的人，越喜歡挑剔別人。07:157.28.202107:157.28.202107:1507:15:317.28.202107:157.28.20214、與肝膽人共事，無字句處讀書。7.28.20217.28.202107:1507:1507:15:3107:15:315、三軍可奪帥也。星期三,七月28,2021七月21星期三,七月28,20217/28/20216、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無力。7時15分7時15分28-七月-217.28.20217、人生就是學校。21.7.2821.7.2821.7.28。2021年7月28日星期
8、三二〇二一年七月二十八日8、你讓愛生命嗎，那么不要浪費時間。07:1507:15
