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《抗HBVG145RHBsAg多克隆抗體制備及鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、抗HBVG145RHBsAg多克隆抗體制備及鑒定【摘要】目的實驗性rG145R變異抗HBs多克隆抗體。方法采用純化全基因重組G145R變異HBsAg常規(guī)皮下免疫制備小鼠多克隆抗體，以間接ELISA、SDS-PAG及Westernblot等多種實驗對制備物進行鑒定，并初步應(yīng)用于轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞的化學(xué)染色。結(jié)果制備物在Westernblot.ELISA中和試驗與抗原替代ELISA中與重組G145R變異HBsAg及重組野生HBsAg等均有很好的特異性與反應(yīng)性；對此兩種抗原的ELISA效價前者顯著高于后者（
2、分別為51200與6400）:將其用于2A8細(xì)胞（轉(zhuǎn)染并分泌G145RHBsAg）爬片的PAP染色，亦取得較理想的實驗結(jié)果。結(jié)論采用重組G145R變異HBsAg免疫成功制備出較高效價的抗體。鑒于該抗體同時與野生重組wHBsAg存在較強交叉反應(yīng)，其與野生抗HBs的混合應(yīng)用能增ELISA免疫逃逸變異的檢測能力?？凇娟P(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒；基因變異；合成肽；多克隆抗體□口Thepreparationandidentificationofanti-HBVG145RHBsAgpolyclonalantibod
3、yLIPei-shan,GONGJing-song,LIShi-jun,etal.BiologicalTechnologyGroupCorporation,WuhanInstituteofBiologicalProducts,Hubei430060,China□[Abstract]ObjectiveToprepatethemousepolyclonalAntiG145RrHBsAbandanalyzeitsimmunologicalcharacteristics?MethodsTherecombi
4、nantG145RmutantHBsAgwererespectivelyusedtodeveloppoly-clonalantibodysthroughimmunizeBALB/crats,andthepolyclonalantibodywereconfirmedbyempiricalmethods,includewesternblot,ELISAandSDSPAGE,andpreliminaryusedinchemicalstainingfortheCHO.ResultsTherecombina
5、ntG145RmutantHbsAbpolywereindentifiedbywesternblotandELISA,itshowedagoodspecificreactionperformeneetobothofG145RrHBsAgandr-wHBsAg.AndthepotencyofthereactionwithG145RrHBsAgwasobviouslyhigherthanr-wHBsAg(theywere51200and6400).AndithadagoodresultofthePAP
6、stainingofcell2A8also?ConclusionThesatisfactoryantibodycouldbecreatedbyimmunizingwithG145RrHBsAg.Becauseofthecrossreactionwithr-wHBsAg,therecombinantG145RmutantHbsAbpolywhichismixedwithr-wHBsAgcanenhaneethedetectivityofELISA?口[Keywords]HepatitisBvirus
7、;Genevariation;Syntheticpeptide;PolyclonalantibodyHBV具有較高的變異趨勢，發(fā)生在S蛋白七”決定簇基因區(qū)段的突變可能導(dǎo)致其HBsAg抗原性改變而形成免疫逃逸株(immuneescapemutantstrain,IEMS)[1]o由S基因第nt587位G-A突變所產(chǎn)生G145R變異株(G145RIEMS)是其中發(fā)生頻率最高，抗原性飄逸最徹底的IEMS之一口~4]o受實驗材料限制，對該變異的研究僅限于其變異機制及其分子流行病學(xué)調(diào)查。為進一步拓展對其基礎(chǔ)
8、與臨床研究范圍，筆者進行抗重組G145R變異S蛋白多克隆抗體(抗rG145RHBspoly)的制備研究，現(xiàn)報道如下?？?材料與方法口11實驗材料重組G145R變異S蛋白(r-G145R-HBsAg)由同濟醫(yī)院醫(yī)學(xué)實驗中心采用親和層析法制備[3];HBsAg◎'決定簇合成多肽(G145R-SP24,包含123-147位氨基酸X腺病毒抗原初提物(ADV-AgX2A8細(xì)胞爬片以及PAP染色試劑等由同濟醫(yī)院醫(yī)學(xué)實驗中心提供;HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG(GAM-HRP)購自Sigma公司。抗HB
