神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及分化

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1、神經(jīng)T?細(xì)胞朱瓊，女，4990年生，重慶市人，漢族，2009年第三軍醫(yī)大學(xué)畢業(yè)，在讀碩士，主要從爭(zhēng)神經(jīng)干細(xì)胞治療阿爾茨海默病的作用及機(jī)制研究。通訊作者：徐亞麗，博士，副主任醫(yī)師，副教授，解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院超聲科，重慶市400037中圖分類號(hào):R394.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文^^4^:2095-4344(2017)17-02708-06橋件接受：2017-01-10ZhuQiong,Studyingformaster'sdegree,DepartmentofUltrasound,SecondAffiliateHosp

2、italofThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,ChinaCorrespondingauthor:XuYa-li,M.D..Associatechiefphysician,DepartmentofUltrasound,SecondAffiliateHospitalofThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及分化朱瓊S皋月娟2,高順記S陳重S劉政S徐亞麗T解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)

3、院超聲科，重慶市400037：2解放軍第三O二醫(yī)院超聲科，北京市100039)電用本文.：朱瓊，皋月娟,高順記,陳重,劉政,徐亞麗.神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)鑒泄及分化卜幾中國(guó)組織工程研究,2017,21(17):2708-2713.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.17.014ORCID:0000-0002-1810-5009(朱瓊)文章快速閱讀:神經(jīng)干細(xì)胞生物學(xué)特征及鑒定光學(xué)顯微鏡觀察神經(jīng)球形態(tài)透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)MTT法繪制生長(zhǎng)曲線免疫熒光檢測(cè)Nestin蛋白表達(dá)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期免疫

4、熒光檢測(cè)GFAP.pill-tubulin.MBP農(nóng)達(dá)文題釋義：神經(jīng)干細(xì)胞：是具冇自我更新和多向分化潛能的原始細(xì)胞，主耍存在于側(cè)腦室下區(qū)和海馬齒狀冋顆粒下層，不僅能分化為多種類型的神經(jīng)細(xì)胞替代缺失神經(jīng)組織，同時(shí)能產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，如腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子及膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子等，并促進(jìn)突觸發(fā)生，調(diào)節(jié)其可塑性，且能重建部分環(huán)路和功能，是神經(jīng)元替代治療的理想靶細(xì)胞。細(xì)胞分化：指同一來源的細(xì)胞逐漸由全能到多能，最后到單能，從而產(chǎn)生形態(tài)功能不同的細(xì)胞群的過程，其本質(zhì)是基因纟R在時(shí)間和空間上的選擇性農(nóng)達(dá)。如神經(jīng)干細(xì)胞能分化

5、為多種類型神經(jīng)細(xì)胞：星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元。同時(shí)該過程受局部微環(huán)境調(diào)節(jié)，多種理化因索嘟能誘導(dǎo)全能細(xì)胞產(chǎn)生分化，如血淸誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化。摘要背景：神經(jīng)干細(xì)胞在神經(jīng)損傷修復(fù)和退行性疾病中有廣泛的應(yīng)用前杲，體外培養(yǎng)鑒定及促神經(jīng)元誘導(dǎo)分化是后續(xù)研究的基礎(chǔ)。目的：采用懸浮神經(jīng)球培養(yǎng)法分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞并對(duì)其鑒定，了解生物學(xué)特性。方法：采用懸浮神經(jīng)球培養(yǎng)法從C57BL/6胎鼠大腦半球分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，觀察形態(tài)特征及超微結(jié)構(gòu)，CCK-8法繪制生長(zhǎng)曲線，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，免疫熒光法檢測(cè)特異性標(biāo)志蛋白Nestin的表達(dá)；

6、用體積分?jǐn)?shù)為1%和10%的血清誘導(dǎo)分化后，免疫熒光法檢測(cè)GFAP、pIH-tubulin和MBP的表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論：①體外培養(yǎng)得到懸浮生長(zhǎng)的神經(jīng)球，生長(zhǎng)曲線和細(xì)胞周期表明細(xì)胞增殖力強(qiáng)；②透射電鏡觀察到神經(jīng)干細(xì)胞核漿比高，呈未分化狀態(tài)；③Nestin免疫熒光陽(yáng)性；④不同體積分?jǐn)?shù)的血淸誘導(dǎo)后均可分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元和少突膠質(zhì)細(xì)胞，體積分?jǐn)?shù)為1%血清能誘導(dǎo)分化得到更多的神經(jīng)元細(xì)胞；⑤結(jié)果表明,采用懸浮神經(jīng)球培養(yǎng)法成功分離培養(yǎng)得到了神經(jīng)干細(xì)胞，低體積分?jǐn)?shù)血淸冇利于神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化。關(guān)鍵詞：干細(xì)胞;分化；神經(jīng)干細(xì)胞;培養(yǎng)

7、;鑒定;血淸;誘導(dǎo)分化;國(guó)家自然科學(xué)基金主題詞：神經(jīng)干細(xì)胞;細(xì)胞,培養(yǎng)的；血淸;細(xì)胞分化;組織工程基金資助：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)I」(81471795)；全軍陜學(xué)科技青年培育計(jì)劃(16QNP102)Cultivation,identificationanddifferentiationofneuralstemcellsZhuQiongHaoYue-juan2,GaoShun-ji1,ChenZhong1,LiuZheng1,XuYa-li1(departmentofUltrasound,SecondAffiliateH

8、ospitalofThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China;2DepartmentofUltrasound,the302ndHospitalofPLA,Beijing100039,China)AbstractBACKGROUND:Neura