甘草多糖提取過(guò)程中除蛋白方法的比較研究開(kāi)題報(bào)告

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1、開(kāi)題報(bào)告甘草多糖提取過(guò)程中除蛋白方法的比較研究　　1選題的背景和意義甘草(Glycyrrhiza)是多年生草本植物，屬豆科甘草屬。作為中藥甘草指的是甘草屬部分植物的根及根莖。我國(guó)作為藥用而收載的甘草主要有烏拉爾甘草(GlycyrrhizauralensisFisch．)、脹果甘草(GlycyrrhizainflataBatal)和光果甘草(aycyrrhizaglabraL)。甘草是一味應(yīng)用極其廣泛的中藥，這與甘草中的有效成分有關(guān)。廣泛存在于各種動(dòng)植物和微生物組織中的多糖，是由各種單糖組成的天然高分子化合物。除典型的

2、纖維素和幾丁質(zhì)外，各種類型的纖維素、果膠、粘液質(zhì)都具有結(jié)構(gòu)多糖的功能。從二十世紀(jì)六十年代后，多糖所具有的各種生理功能逐漸為人們所重視，尤其是增強(qiáng)免疫力的功能被廣泛認(rèn)同，并被廣泛應(yīng)用于腫瘤化療等。目前世界各國(guó)，尤其是美國(guó)、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家正投入大量人力、財(cái)力對(duì)各種動(dòng)植物、微生物多糖進(jìn)行深入研究。但天然植物中多糖與蛋白質(zhì)兩種高分子成分共存，且兩種物質(zhì)分子量相近，另外糖常常與蛋白形成糖蛋白復(fù)合物，使蛋白質(zhì)的脫除變得更加困難。但也許正是由于結(jié)合了這部分蛋白質(zhì)，多糖才具有眾多獨(dú)特的生理功能。另?yè)?jù)報(bào)道甘草中的多糖有降血糖、抑瘤作用

3、等多種功能：可是在提取甘草多糖時(shí)，提取物中蛋白質(zhì)含量很高，這對(duì)純化帶來(lái)了很大困難。本文針對(duì)甘草多糖水提物中蛋白質(zhì)含量高這一情況，對(duì)幾種甘草多糖脫蛋白方法進(jìn)行了對(duì)比研究，以確定最佳脫蛋白。2相關(guān)研究的最新成果及動(dòng)態(tài)對(duì)于甘草多糖的藥理研究剛剛起步，主要在抗病毒、抗腫瘤、提高免疫功能等方面。甘草多糖是近年來(lái)我國(guó)學(xué)者從中藥甘草中提取出的活性中藥多糖，具有一定的抑瘤作用。通過(guò)建立好的Balb/c荷瘤小鼠模型進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)，計(jì)算抑癌率是比較直接準(zhǔn)確的觀察甘草多糖抑瘤作用的方法。給予甘草多糖處理過(guò)的小鼠的腫瘤明顯縮小，且輕于只給予生

4、理鹽水的對(duì)照組小鼠，二者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著差異，這與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道一致。用甘草多糖（GPS）作為抗病毒制劑，檢測(cè)其抗牛艾滋病病毒、腺病毒、柯薩奇病毒。多糖是一種重要的生物高分子化合物，作為生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑可影響機(jī)體免疫功能力4而起到抗炎、抗病作用。結(jié)果表明GPS對(duì)三種病毒均有較明顯的拮抗作用，對(duì)艾滋病病毒的抑制率為36.2%可影響病毒合胞體形成^達(dá)到保護(hù)細(xì)胞作用，還可影響腺病毒和柯薩奇病毒的吸附及進(jìn)入細(xì)胞的功能，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞作用。其保護(hù)率分別為74.9%和59.0%因此可認(rèn)為GPS可吸附于細(xì)胞表面或進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，以防止病毒的

5、吸附和進(jìn)入，可適用于預(yù)防病毒感染和治療。另外，李曉冰;何小鵑等建立H22荷瘤小鼠模型,觀察甘草多糖對(duì)模型小鼠脾臟調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響,探討甘草多糖的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制結(jié)果:模型組小鼠Treg細(xì)胞比例明顯高于正常組,甘草多糖組Treg細(xì)胞比例低于模型組(P<0.01),甘草多糖組脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率明顯高于環(huán)磷酰胺組。甘草多糖與環(huán)磷酰胺無(wú)交互作用。結(jié)論:甘草多糖可能通過(guò)降低荷瘤小鼠Treg細(xì)胞的比例及提高脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率而發(fā)揮抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)作用。陸清兒;童朝明等研究了甘草多糖的廣泛用途及抑菌效果試驗(yàn)方法與試驗(yàn)過(guò)程

6、。結(jié)果表明:甘草多糖成品對(duì)大腸桿菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)均為16萬(wàn)mg/L;對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC和MBC均為10萬(wàn)mg/L;其純品對(duì)大腸桿菌的MIC和MBC均為4萬(wàn)mg/L、對(duì)金黃葡萄球菌的MIC和MBC均為2萬(wàn)mg/L;純品對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈分別為5mm和8mm。程安瑋;金征宇等通過(guò)研究甘草多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞NO、iNOS的生成及iNOSmRNA表達(dá)的影響,結(jié)果表明:GP能劑量依賴性地增加活化的巨噬細(xì)胞中NO的生成量及iNOS的活性,當(dāng)GP的添加濃度為400μg/m

7、l時(shí),NO、iNOS的分泌量和iNOSmRNA表達(dá)達(dá)到最大。固定GP添加量為100μg/ml,培養(yǎng)時(shí)間在48h時(shí),NO、iNOS的分泌量和iNOSmRNA表達(dá)量最大。這表明GP刺激巨噬細(xì)胞NO合成的調(diào)節(jié)可發(fā)生在iNOS的轉(zhuǎn)錄水平,從而刺激巨噬細(xì)胞NO大量合成與釋放,GP的免疫調(diào)節(jié)作用和抗腫瘤作用機(jī)制可能與GP刺激巨噬細(xì)胞iNOS從頭合成從而增加NO生成有關(guān)。3課題的研究?jī)?nèi)容及擬采取的研究方法、研究難點(diǎn)及預(yù)期達(dá)到的目標(biāo)3.1課題研究?jī)?nèi)容1、甘草多糖提取方法的確定（在老師指導(dǎo)下，并通過(guò)查找文獻(xiàn)資料，最終確定了最佳制備粗多

8、糖的實(shí)驗(yàn)條件。）2、粗多糖除蛋白方法的比較研究（對(duì)1制備的粗多糖進(jìn)行三種除蛋白試驗(yàn)，比較分析找出最佳的除蛋白方法）3.2擬采取的研究方法1、超聲波法輔助提取甘草多糖：甘草飲片→粉碎→超聲波提取三次→過(guò)濾→濾液濃縮→乙醇沉淀→過(guò)濾得沉淀→無(wú)水乙醇，丙酮，乙醚分別洗滌三次→干燥→粗多糖產(chǎn)品42、Sevag法:取一定粗多糖熱水溶解→過(guò)濾→定容一定體積