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《花鱸弧菌病病原菌_哈維氏弧菌_的分離與鑒定.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第9卷第1期中國水產(chǎn)科學Vol.9No.12002年3月JournalofFisherySciencesofChinaMar.,2002花鱸弧菌病病原菌(哈維氏弧菌)的分離與鑒定*王保坤,余俊紅,李筠,紀偉尚,徐懷恕(青島海洋大學海洋生命學院,山東青島266003)摘要B1999年4~5月,山東省青島市膠南海區(qū)網(wǎng)箱養(yǎng)魚場花鱸(Lateolabraxjaponicus)幼魚發(fā)生暴發(fā)性傳染病,死亡率達50%。從具有明顯癥狀的病魚的病灶組織分離到1株優(yōu)勢菌SF-1,經(jīng)人工感染和從人工感染發(fā)病的花鱸再分離的SF-3菌株的再感染試驗結(jié)果表明,所分離的菌株為此次花鱸爛尾病的致病菌。經(jīng)形態(tài)、生理生化等64項
2、特征指標鑒定,SF-1和SF-3均為哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)。藥敏試驗結(jié)果表明,頭孢噻肟、頭孢三嗪、頭孢孟多、呋喃妥因、氯霉素、氧哌嗪青霉素、磺胺類、復方磺胺、三甲氧芐氨嘧啶、多粘菌素E等10種藥物對該菌株有明顯的抑制作用。關(guān)鍵詞B花鱸;哈維氏弧菌;藥敏試驗中圖分類號BS943.211文獻標識碼BA文章編號:1005-8737(2002)01-0052-04弧菌病是危害海水養(yǎng)殖魚類最嚴重的疾病之期間發(fā)病的花鱸幼苗。[1~4]一,可以感染多種魚類并造成大量死亡。其1.2病原菌的分離中,哈維氏弧菌已逐漸成為水產(chǎn)動物,包括無脊椎動無菌操作挑取患病花鱸病灶部位,以平板稀釋[5~8][9
3、]物(如蝦)和脊椎動物(如魚)養(yǎng)殖的一大殺手,涂布法進行細菌分離,培養(yǎng)基為2216E和TCBS。因而越來越引起水產(chǎn)養(yǎng)殖工作者的重視。1999年428e培養(yǎng)24h后,挑取優(yōu)勢菌落,在2216E平板上~5月,山東省青島市膠南小口子網(wǎng)箱養(yǎng)魚場養(yǎng)殖劃線純化。將純化后的菌株置于15%甘油中,并保的花鱸(Lateolabraxjaponicus)幼魚發(fā)生大量死亡,存于-80e冷凍箱中備用。病魚的主要癥狀為體表發(fā)白、游動遲緩、厭食、尾部1.3感染試驗嚴重潰爛(有的尾鰭已完全爛掉)。從具有明顯發(fā)病試驗用花鱸為海捕健康幼魚,體重15~20g,體癥狀的病花鱸的尾、腸、鰓等病灶部位分離到1株優(yōu)長10~15cm。將幼
4、魚在3m@3m@1.5m的水泥勢菌SF-1,經(jīng)人工感染試驗再分離到1株優(yōu)勢菌池中暫養(yǎng)7d后,分組飼養(yǎng)在50L的試驗桶中(盛SF-3。本文對這2株菌的致病性、形態(tài)、生理生化特40L沙濾海水),每組25尾,設(shè)2個平行組。將待征及藥物敏感性進行研究,旨為有效防治弧菌病的檢菌株斜面培養(yǎng)24h后,用無菌生理鹽水(0.85%暴發(fā)提供基礎(chǔ)資料。NaCl)洗下,制成菌懸液,肌肉注射,注射菌液濃度4567為5.0@10、5.0@10、5.0@10、5.0@10、5.0@1材料與方法810cfu/ml,每尾注射0.1ml,對照組注射等量的無1.1病魚菌生理鹽水。每天正常投喂魚粉,日換水量為水體取自山東青島膠南小口
5、子網(wǎng)箱養(yǎng)魚場,為養(yǎng)殖的1/2,水溫24~26e。1.4菌種鑒定收稿日期B2001-04-121對待測菌的64項形態(tài)、生理生化特征進行測基金項目B國家自然科學基金資助項目(39870581);國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃/9730資助項目(G1999012004)1定。供試菌株在2216E培養(yǎng)基上活化后分別接種作者簡介B王保坤(1976-),男,青島海洋大學碩士研究生.于各測試培養(yǎng)基。除耐鹽性試驗、TCBS培養(yǎng)基生*責任作者長和唯一碳源試驗外,其他培養(yǎng)基均以陳海水配制,第1期王保坤等B花鱸弧菌病病原菌(哈維氏弧菌)的分離與鑒定53[9~13]測定方法參照有關(guān)文獻進行。同時還用BI-OLOG鑒定方法[
6、14]對鑒定結(jié)果進行確證。表1人工感染試驗結(jié)果1.5藥敏試驗Table1ResultsofchallengetestsofSF-1strainbymusclein-用紙片法在普通2216E固體培養(yǎng)基平板上測jection定待測菌株對藥物的敏感性。28e培養(yǎng)24h,觀測感染劑量/(cfu#ind-1)試驗魚/尾死亡魚/尾死亡率ChallengedoseTestnos.Deadnos.Mortality有無抑菌圈及其直徑大小,根據(jù)抑菌圈直徑判斷標5.0@10325@200[9,15]425@220.04準判斷待測菌株對藥物的敏感性結(jié)果。藥敏5.0@10[9,15]5.0@10525@2340.68
7、紙片為上海市醫(yī)學化驗所產(chǎn)品和OXOID公司5.0@10625@2490.98產(chǎn)品。5.0@10725@2501對照Control25@2002結(jié)果2.1病原菌的分離及感染試驗2.2細菌鑒定從具有明顯發(fā)病癥狀的花鱸的病灶組織分離到經(jīng)形態(tài)、生理生化特征鑒定(見表2),SF-1和1株優(yōu)勢菌SF-1,經(jīng)人工感染試驗證實,該菌株對健SF-3的特征基本相同,菌體呈短桿狀、極生單鞭毛、康花鱸具有明顯的致病作用(
