文蛤坎氏弧菌的分離鑒定-論文.pdf

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1、山東畜牧獸醫(yī)2014年第35卷文蛤坎氏弧菌的分離鑒定王雪鵬(山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院泰安271018)柴雪良閆茂倉(浙江省近岸水域生物資源開發(fā)與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室溫州)摘要本文從江蘇文蛤養(yǎng)殖區(qū)發(fā)病丈蛤中分離到l株優(yōu)勢菌，人工感染顯示菌株能引起供試文蛤發(fā)病，死亡率為68．75％，且發(fā)病癥狀與原發(fā)病癥狀相同，提示該菌是引起文蛤大面積死亡的主要致病菌。對其形態(tài)、生理生化特征致病性進(jìn)行了初步研究。結(jié)果顯示分離菌株為革蘭氏陰性茵，直桿狀，主要生理生化指標(biāo)賴氨酸脫羧酶、硝酸鹽還原、甘露糖、氧化酶為陽性，精氨酸脫羧酶、鳥氨酸酸脫羧酶、V．P為陰性。結(jié)合革蘭氏染色、形態(tài)、生理生化特點(diǎn)，最

2、后鑒定該分離菌株為坎氏弧菌。關(guān)鍵詞文蛤坎氏孤茵16SrRNA中圖分類號：$852．613文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1007—1733(2014)06—0022—02文蛤(Meretrixmere~ixLinnaeus)是我國沿海常見的一光澤，表皮部分脫落、表面粘液較少，解剖發(fā)現(xiàn)外套膜種重要經(jīng)濟(jì)貝類，因其肉質(zhì)細(xì)嫩、營養(yǎng)豐富，深受國內(nèi)萎縮，閉殼肌松弛、開合無力，有些發(fā)爛發(fā)白，軟體部外消費(fèi)者歡迎，是出口創(chuàng)匯的重要水產(chǎn)品之一。文蛤養(yǎng)消瘦，顏色淡紅，血管無色，部分病蛤腮黏液明顯增殖在我國已有多年的歷史，隨著國際市場對文蛤需求量多。的不斷增長，我國的文蛤養(yǎng)殖業(yè)得到了迅速發(fā)展，但是1

3、．2分離方法無菌鹽水洗凈，用70％的酒精棉球?qū)w近l0幾年來，隨著文蛤養(yǎng)殖規(guī)模的逐年擴(kuò)大，養(yǎng)殖環(huán)境表擦拭消毒，無菌手術(shù)刀開啟，取肝胰臟等部位無菌勻惡化導(dǎo)致微生物疾病的流行而引發(fā)的養(yǎng)殖文蛤的大規(guī)模漿器中勻漿處理，zobell2216E平板和TCBS平板劃線接死亡屢屢發(fā)生，已造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，全國養(yǎng)殖貝類種，28~C培養(yǎng)24h后，選取優(yōu)勢菌落進(jìn)行重復(fù)劃線純化，因微生物疾病導(dǎo)致死亡而造成的經(jīng)濟(jì)損失保守估計(jì)每年純培養(yǎng)物于4~C冰箱中保存。達(dá)到2O～30億元¨】。而弧菌(Vibrio)是導(dǎo)致文蛤發(fā)病的主要1I3人工感染試驗(yàn)人工感染試驗(yàn)在20L水族箱中進(jìn)行，致病菌，發(fā)病的文蛤表

4、現(xiàn)為不能潛入沙中，雙殼不能緊溫度28~C，鹽度26．4，pH8．2，連續(xù)充氣，每組放l6只2cm閉，殼邊緣有許多粘液，消化道內(nèi)細(xì)菌大量繁殖【2]，國內(nèi)大小的文蛤。換水1次／d，試驗(yàn)組調(diào)節(jié)水體中細(xì)菌濃度為外的報(bào)道有副溶血弧菌【‘6l和弗氏弧菌【，鄭國興等【發(fā)現(xiàn)10cf~ml，投單胞藻1次／d；對照組不加入菌體，按上述導(dǎo)致江蘇沿岸文蛤大規(guī)模死亡的病原菌為溶藻弧菌，而方法飼養(yǎng)；連續(xù)觀察12d，紀(jì)錄死亡狀況，并進(jìn)行解剖和坎氏弧菌作為文蛤病原菌的研究還未見報(bào)道。本研究對病原的再分離以確定是否死于攻毒活菌引起的感染。發(fā)病文蛤優(yōu)勢菌株進(jìn)行分離、鑒定，并進(jìn)行人工感染試1．4細(xì)菌鑒定按

5、一般細(xì)菌常用鑒定方法fl。】進(jìn)行分離菌驗(yàn)，探討分析導(dǎo)致文蛤大規(guī)模死亡的病原，旨在為文蛤的生物學(xué)性狀測定，包括革蘭氏染色、形態(tài)觀察、生理疾病研究提供理論依據(jù)，為文蛤健康養(yǎng)殖提供參考。生化特性測定。1材料與方法2結(jié)果與分析1．1發(fā)病文蛤癥狀患病文蛤(殼長2cm左右、花色暗淡無2．1細(xì)菌分離及其形態(tài)特征經(jīng)分離純化后，從病蛤中基金項(xiàng)目：浙江省近岸水域生物資源開發(fā)與保護(hù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金(J2013006)；浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012C22072，2012F20029)；浙江省自然科學(xué)基金fY14C190013)．·通訊作者I．IL-ILl-Lt-tI_t_．I_I_LtI_

6、-I__L_L-L_I_l_L-L_I_-tL■—L-tL●_-●l_L-．-L_I_t_L_■L●t-_I_LL-I_LLL-tItL-__L_t．L_t-●__l_■EM益生菌很快在仔豬腸道內(nèi)定植，與腸黏膜上皮緊密結(jié)ementinrmnbowtroutbypotentialprobioticbacteria[J]．FishShellfish合形成生物屏障，產(chǎn)生有機(jī)酸、降低腸道pH及氧化還原lmm~ol，2003，15(5)：443452．電位，抑制有害菌的侵入，從而達(dá)到預(yù)防腹瀉的目的。[4】孔海英，孟憲梅．動(dòng)物微生態(tài)制劑的研究進(jìn)展及發(fā)展應(yīng)用前景[J】．參考文獻(xiàn)吉林

7、糧食高等?？茖W(xué)校學(xué)報(bào)，2006，21(I)：4-7．[1]張麗芳，王占武．戊糖乳桿菌制劑防治仔豬腹瀉效果初探[J]_中[5】林元銀，鄒綺玉，周亦飛．．抗生素添加劑的負(fù)面效應(yīng)及其主要替國微生態(tài)學(xué)雜志，2008，20(6)：568～570．代品的研究研究前景[J】．飼料廣角．2001(2)：18—21．[2]王桂瑛，劉燕．益生素的研究及應(yīng)用進(jìn)展[J]．飼料博覽，2004(6)：[6】趙青．早期斷奶仔豬腹瀉病藥物防治試驗(yàn)[J]．浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，4—6．2005．17(2)：90—93．[3】NikoskelamenS，ouweh．dndAC，BylundG，