菌種活化方法.doc

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1、低溫保存管（cryotube）中之一般菌種臨時(shí)存放及活化A.低溫保存管之臨時(shí)存放及解凍1.低溫保存管（cryotube）應(yīng)存放于－20℃~－80℃之低溫條件下。2.準(zhǔn)備37℃之70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險(xiǎn)；若以37℃水浴取代，應(yīng)避免水中微生物污染），其中事先安放小試管架（可放置cryotube之大小），液面不可高達(dá)管塞。3.將cryotube從低溫保存條件中取出，置于37℃浴槽之小試管架上。4.不斷輕微搖動(dòng)cryotube，液面不可高至管塞，直至結(jié)冰完全溶解（約需2分鐘）。

2、B.菌株活化:在無菌操作下1.用無菌微量吸管，從已溶解之cryotube吸取50?l（或1~2滴）之菌液，滴入固態(tài)指定培養(yǎng)基(培養(yǎng)基編號(hào)及溫度示于菌株訂購單)某一邊緣附近，以劃線法接種于培養(yǎng)基。2.將接種好的培養(yǎng)基置于指定溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。C.劃線法1.手持金屬接種環(huán)，用酒精燈將接種環(huán)（共約5公分）燒至火紅，并不斷來回?zé)窘饘俟潭U之前約10公分，等待約10秒鐘，將接種環(huán)前端輕觸培養(yǎng)基邊緣凝膠（無菌體部份），待接種環(huán)完全冷卻后，以環(huán)沾黏菌滴，由培養(yǎng)基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線，直到涵蓋1/3培養(yǎng)基為止（I區(qū)）。2.

3、灼燒接種環(huán)，待數(shù)秒冷卻后，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)基自I區(qū)涂布的邊緣再橫劃數(shù)條線到未接種的區(qū)域（II區(qū)）。3.重復(fù)2.的動(dòng)作完成III區(qū)與IV區(qū)。4.灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)歸位。D.圖示（1）金屬接種環(huán)（2）平板劃線法冷凍干燥管之開管說明下列步驟請(qǐng)?jiān)跓o菌環(huán)境下操作：1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加熱外管之尖端。2、滴數(shù)滴無菌水于加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。3、取出隔熱纖維紙和內(nèi)管，以滅菌過的鑷子取出內(nèi)管之棉塞。4、(a)適用于細(xì)菌用無菌吸管，吸取0.3-0.5ml指定之液體培養(yǎng)基，滴入內(nèi)管內(nèi)，并輕微震蕩（可用該吸

4、管協(xié)助），直到均勻懸浮。(b)適用于霉菌、酵母菌用無菌吸管，吸取0.3-0.5ml無菌水，滴入內(nèi)管內(nèi)，待干燥粉末溶解后，以無菌吸管吸取并滴入約含有5ml無菌水之試管內(nèi)，輕微震蕩使其均勻后，靜置30至60分鐘。5、取0.1-0.2ml之菌體懸浮液于指定的平板培養(yǎng)基上，做劃線分離培養(yǎng)或做成一系列之稀釋，用無菌L型玻棒均勻涂抹，以檢驗(yàn)菌種之純度及活化情形，而剩余的菌體則全部移入指定的液體培養(yǎng)基內(nèi)，并依指定的溫度培養(yǎng)之。6、某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，遲滯期(lagperiod)較長，必須等培養(yǎng)二倍時(shí)間后才能長出，且再經(jīng)過一、二

5、次繼代培養(yǎng)(Subculture)后才能正常生長。經(jīng)過以上的努力后仍培養(yǎng)失敗，才視為不能活化。7、若菌種未能活化，或活化之菌落有疑問時(shí)，請(qǐng)于收到菌種之一個(gè)月內(nèi)，以問題菌株反應(yīng)單傳真至本中心，即進(jìn)行處理。8．未開封之冷凍干燥管，請(qǐng)冷藏于4℃冰箱，切勿冷凍保存。