分離以尿素為氮源的微生物.ppt

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1、第一部分微生物的利用實(shí)驗(yàn)2分離以尿素為氮源的微生物浙科版選修11.使用專一的培養(yǎng)基（含有尿素）分離專一的細(xì)菌（有脲酶的細(xì)菌）。2.利用指示劑顏色的變化檢知（脲酶）所催化的反應(yīng)。1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O一、基礎(chǔ)知識(shí)要分離一種微生物，必須根據(jù)該微生物的特點(diǎn)，包括營養(yǎng)、生理、生長條件等；方法：⑴抑制大多數(shù)微生物生長；⑵造成有利于該菌生長的

2、環(huán)境。結(jié)果：培養(yǎng)一定時(shí)間后，該菌數(shù)量上升，再通過平板稀釋等方法對(duì)它進(jìn)行純化培養(yǎng)分離。3、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。4、培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理本實(shí)驗(yàn)中，酚紅作為酸堿指示劑被添加到了培養(yǎng)基中，其變色范圍是pH6.4～8.2，在中性情況下呈黃色，堿性情況下呈紅色，尿素NH3中性堿性酚紅顏色：黃色紅色細(xì)菌１、制備無菌的尿素固體培養(yǎng)基

3、和ＬＢ固體培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g瓊脂糖0.5g酚紅0.25g水15mlLB培養(yǎng)基蛋白胨0.25g酵母粉0.12gNaCl0.25g瓊脂糖0.5g水25ml對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組二、操作過程滅菌后再加尿素２、倒平板：需要倒2個(gè)ＬＢ培養(yǎng)基，6個(gè)尿素固體培養(yǎng)基LB(對(duì)照)尿素10-410-5每個(gè)稀釋度1個(gè)LB對(duì)照平板3個(gè)尿素平板(平行重復(fù)組)３、制備一定濃度梯度的細(xì)菌懸液：１g土壤＋９９ml無菌水，振蕩，為１０２稀釋液，依次制備１０３、１０４、１０５的土壤稀釋液。４、稀釋涂布分離法分離

4、細(xì)菌取10-4和10-5各0.1ml菌懸液接種涂布分離涂布前后三角刮刀需要灼燒嗎？５、培養(yǎng)觀察（倒置，３７度）平板倒置按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)LB培養(yǎng)基上10-2、10-3、10-4、10-5稀釋度土樣涂布結(jié)果尿素培養(yǎng)基上10-2、10-3、10-4、10-5稀釋度土樣涂布結(jié)果