櫛江珧解剖卵的體外促熟研究.pdf

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1、第45卷第12期2015年12月中國海洋大學學報PERIODICALOFOCEANUNIVERSITYOFCHINA45(12)：038～042Dec．，2015研究簡報櫛江珧解剖卵的體外促熟研究。李浩浩，王昌勃，于瑞海，牟宗寶，李琪料(中國海洋大學海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室，山東青島266003)摘要：本研究探討了在不同濃度或不同處理時間下氨海水、5一羥色胺、多巴胺和維生素對櫛江珧(A￡ri卵npectinata)解剖卵的促熟作用。通過體外浸泡的方法處理櫛江珧卵母細胞使其成熟，并完成人工授精。研究表明：濃度0．008％～0．014％的氨海水處理40～60rain可顯

2、著提高櫛江珧解剖卵的生發(fā)泡破裂率和受精率(P

3、門(Mollusca)瓣鰓綱(Lamellibranchia)貽貝目(Mytiloi—da)江珧科(Pinnidae)江珧?qū)?Atrina)E1

4、，俗稱“海鍬”、“大海紅”，廣泛分布于溫、熱帶泥沙質(zhì)近海海域，在中國渤、黃、東、南海均有分布。江珧柱肉質(zhì)細嫩肥白，營養(yǎng)豐富，深受國內(nèi)外市場的歡迎[2]。近年來，由于環(huán)境污染和過度捕撈，造成櫛江珧野生資源總量急劇減少，產(chǎn)量難以滿足市場消費需求[3]。為了提高產(chǎn)量，國內(nèi)外學者開展了櫛江珧的人工育苗和養(yǎng)殖技術(shù)等方面的研究[4。5]，發(fā)現(xiàn)櫛江珧排卵較難，即使親貝性腺飽滿、成熟度高，自然排卵和人工催產(chǎn)仍很困難，這制約了櫛江珧的人工育

5、苗及規(guī)模化生產(chǎn)。而解剖法是一種快速、方便的育苗方式[6]，但在櫛江珧育苗中應用很少。貝類的繁殖中，精子活力和卵子的成熟度是決定受精作用和胚胎發(fā)育順利的關(guān)鍵因素[7]。目前，在雙殼貝類人工育苗中常會遇到如何獲取成熟卵子的問題，而雙殼貝類的卵子多是分批成熟的，解剖獲得的卵子存在成熟度不夠及發(fā)育不同步的現(xiàn)象，即使親貝性腺成熟度高，解剖獲取的卵子仍需要體外促熟，才能受精和正常發(fā)育[8]。目前，國內(nèi)外學者開展了氨海水、5一羥色胺(5一HT)、多巴胺、維生素等藥物在不同濃度、不同處理時間下對雙殼貝類解剖卵的體外促熟研究[9。12

6、，為櫛江珧體外促熟研究提供了借鑒。櫛江珧?qū)儆跍p數(shù)

7、第一次分裂中期受精，解剖出的成熟卵大都處于減數(shù)第一次分裂前期，需要對卵子促熟，才能使其成熟[1引。本實驗用不同濃度的氨海水、5一羥色胺、多巴胺和維生素在不同處理時間下對櫛江珧解剖卵進行促熟，通過觀察生發(fā)泡破裂(GerminalVes—icleBreakdown，GVBD)[14I、受精和畸形情況，分析得出櫛江珧解剖卵適宜的促熟藥品及其最適濃度、最適授精時間，建立櫛江珧解剖卵的體外促熟技術(shù)，并進行育苗生產(chǎn)應用試驗，規(guī)?；嘤擞缟a(chǎn)所需的幼蟲，為建立相關(guān)類型貝類解剖卵的體外促熟技術(shù)和櫛江珧人工育苗提供了基礎(chǔ)資料。1材料與方法1．1精卵的獲得實驗用櫛江珧親貝為煙臺海區(qū)

8、養(yǎng)殖的成熟2～4齡貝。親貝經(jīng)過暫養(yǎng)穩(wěn)定后，挑選發(fā)育良好的親貝，解剖獲得精卵[15I。將卵液用100目篩絹濾去較大組織塊后，再用400目篩絹去除組織液和微小雜質(zhì)；精液用300目篩絹過濾，收集。檢查精卵狀態(tài)，選用活性好的精子和成熟度高的卵子用于實驗。1．2卵母細胞的促熟1．2．1藥物濃度實驗室溫下(23±1℃)用10mL離心管分別加入等量卵液，再加入等量不同濃度的處*基金項目：國家十二五科技支撐計劃項目(2011BADl3801)；國家海洋公益性行業(yè)科研專項(201305005)；山東省優(yōu)秀中青年科學家科研獎勵基金項目(BS2012HZ020)資助收稿日期：2014一l

9、O一30；修訂日期：201504—17作者簡介：李浩浩(1991一)，男，碩士生，主要從事貝類遺傳育種研究。Email：haohaolilll0@126．corn**通訊作者：E-mail：qili66@OUC．edu．crl12期李浩浩，等：櫛江珧解剖卵的體外促熟研究理液，控制卵密度為500～1000個／mL，搖勻計時。氨海水處理濃度梯度設(shè)定為0．002％、0．008％、0．014％、0．020％和0．026％(以分析純氨水25％～26％為100％)；5一羥色胺處理濃度梯度設(shè)定為1、2、3和4mmol／L；多巴胺處理濃度梯度設(shè)定為0．001、0．01、0．1和