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《貝類精子質(zhì)量檢測與評價方法的研究Ⅴ櫛江珧精子線粒體活性的熒光檢測.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第31卷第6期廣東海洋大學學報V01．31No．62011年12月JournalofGuangdongOceanUniversityDec．2011貝類精子質(zhì)量檢測與評價方法的研究V：櫛江珧精子線粒體活性的熒光檢測鄭嬌，王梅芳，余祥勇(廣東海洋大學水產(chǎn)學院，廣東湛江524025)摘要：采用羅丹明123(Rhl23)和碘化丙啶(PI)兩種熒光染料對櫛江珧(Atrinapectinata)精子線粒體活性進行檢測，比較不同染液濃度和染色時間的檢測效果，并用該方法檢測和比較超低溫冷凍保存對線粒體活性的影響
2、。結(jié)果顯示：Rhl23和PI染色的最適染液濃度均為10Ixg／mL，染色時間控制在10min之內(nèi)；染色后具有線粒體活性的精子發(fā)出綠色熒光，死精子發(fā)出紅色熒光，質(zhì)膜受損但線粒體還未受損的精子發(fā)出紅綠色熒光，表明Rhl23和PI雙熒光染色檢測櫛江珧精子線粒體活性是可行的；精液經(jīng)冷凍后，線粒體活性為61．9％、質(zhì)膜完整率56．8％，顯著低于新鮮精液組(95．3％、93．5％)，表明冷凍對精子結(jié)構(gòu)會造成不同程度的損傷，Rhl23和PI雙熒光染色法可用來檢測櫛江珧精子質(zhì)量。關鍵詞：櫛江珧；精子；線粒體；羅丹
3、明123(Rhl23)；碘化丙啶(PI)；熒光染色中圖分類號：Q959．215；Q954．43文獻標志碼：A文章編號：1673—9159(2011)06—0086—05StudyofQualityDetectionandEvaluationonSpermofMolluscV：DetectionofSpermMitoehondrialActivityofAtrinapectinatabyUsingFluorescentDyeZHENG-Jiao，WANGMei-fang，YUXiang—yong(F
4、isheriesCollege，GuangdongOceanUniversity，Zhanjiang524025，China)Abstract：Twofluorescentdyes，Rhodaminel23(Rhl23)andPropidiumiodide(PI)，wereusedtodetectthemitochondrialactivityofthespermatozoaofAtrinapectinata，andthetestingeffectofdifferentstainingtimean
5、ddyeconcentrationwerealsocompared，andthemitochonddalactivityofspermaftercryopreservation(frozeninliquidnitrogenfor24h1wasdetected．Theresultshowedthatthemosteffe：ctivestainingappearedwhentheconcentrationofRhodaminel23andPropidiumiodidewerel0I，tg／mL，and
6、theoptimumreactiontimewas10min．Theactivityofmitochondfiaspermemittedgreenfluorescence,anddeadspermemittedredfluorescence．a(chǎn)ndspermwithdamagedplasmalemmaandundamagedmitochondriasentoutred—greenfluorescence．Therefore．Rhl23-PIdoublestainingwasfeasible．Fro
7、zensperm’Smitochondrialactivityandplasmamembraneintegrity’was61．8％，56．8％，respectively,andwaslowerthanfreshsperm(95．3％，93．5％)．Theresultindicatedthatthefreezing··thawingprocessdamagedspermstructureandRh123-·PIdoublestainingcoulddetectthequalityofthesper
8、matozoaofAtrinapectinata．·、Keywords：Atrinapectinata；spermatozoa；mitochondria；Rhodaminel23；Propidiumiodide；fluorescentstaining收稿日期：2011-10—11基金項目：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(200903028)；廣東省科技計劃項目(20108031300011)第一作者：鄭嬌(1986一)，女，碩士研究生，海產(chǎn)經(jīng)濟動物發(fā)育生物學。通訊作者：余祥勇(1966
