資源描述：
《氨海水與5-羥色胺對(duì)櫛孔扇貝解剖卵的體外促熟作用.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第41卷第4期2011年4月中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)PERI()DICAL0F0CEANUNIVERSITY0FCHINA41(4)：046～050Apr．。2011氨海水與5一羥色胺對(duì)櫛孔扇貝解剖卵的體外促熟作用。邸煒鵬，王昭萍“，于瑞海，周珊珊，顧玲玲，李寧(中國(guó)海洋大學(xué)海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島266003)摘要：研究氨海水與5一羥色胺(5-HT)對(duì)櫛孔扇貝解剖獲得卵母細(xì)胞的促熟作用。通過(guò)體外浸泡的方法處理櫛孔扇貝卵母細(xì)胞使其成熟，并完成人工受精。結(jié)果表明一定濃度的氨海水可顯著促使櫛孔扇貝卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂，但
2、經(jīng)過(guò)氨處理的卵母細(xì)胞受精率卻不高；5-羥色胺不能誘導(dǎo)櫛孔扇貝卵母細(xì)胞生發(fā)泡破裂，但可有效地使已經(jīng)發(fā)生生發(fā)泡破裂的卵母細(xì)胞進(jìn)一步成熟。先用氨海水處理然后用5一羥色胺處理可以得到最佳誘導(dǎo)效果，受精率可達(dá)(40．02士2．73)％。關(guān)鍵詞：櫛孔扇貝；體外成熟；氨海水；5-羥色胺中圖法分類(lèi)號(hào)：s961．2+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1672—5174(2011)04-046—05雙殼貝類(lèi)的繁育過(guò)程中，常采用解剖取卵、人工授精的方法，以避免精液過(guò)多的現(xiàn)象[1]。然而，貝類(lèi)的卵子多是分批成熟分批產(chǎn)出的，解剖獲得的卵子存在成熟度不
3、夠及發(fā)育不同步現(xiàn)象，對(duì)其進(jìn)行體外促熟是必要的。目前關(guān)于貝類(lèi)解剖卵的體外促熟研究報(bào)道不多，僅見(jiàn)于太平洋牡蠣(Crassostreagigas)[2]、馬氏珠母貝(Pinctadamartensii)[3
4、、紫扇貝(Argopectenpurpu—ratus)[引、硬殼蛤(Mercenariamercenaria)[5I、浪蛤(Spisula)[6]等幾種貝類(lèi)中。已有的研究結(jié)果表明海水浸泡、維生素、氨海水(AmmoniaSeawater，AS)、5一羥色胺(5一HT)、組胺等對(duì)貝類(lèi)的解剖卵都有一定的促熟作用。櫛孔扇貝(C
5、hlamysfar理一)是我國(guó)北方重要的養(yǎng)殖貝類(lèi)，因其解剖卵無(wú)法完成受精作用，卵子都是通過(guò)自然產(chǎn)出或誘導(dǎo)排放的途徑獲得，迄今未有其解剖取卵、體外促熟的報(bào)道。本研究采用氨海水和5一羥色胺(5一HT)對(duì)櫛孔扇貝的解剖卵進(jìn)行體外促熟研究，通過(guò)對(duì)生發(fā)泡破裂(GerminalVesicleBreakdown，GVBD)情況和受精情況的分析來(lái)衡量2種試劑的促熟作用，探索扇貝解剖取卵、人工受精的可行性，最后通過(guò)氨和5一羥色胺的雙因子處理建立了櫛孑L扇貝解剖獲卵的體外促熟技術(shù)，該技術(shù)將在櫛孔扇貝的繁殖和遺傳操作中得到應(yīng)用，并且對(duì)于建
6、立相關(guān)類(lèi)型貝類(lèi)卵母細(xì)胞的體外促熟技術(shù)均有借鑒。1材料與方法1．1精卵的獲得實(shí)驗(yàn)用櫛孔扇貝親貝為青島海區(qū)養(yǎng)殖的成熟2齡貝(殼長(zhǎng)6．19cm4-0．5cm，殼寬2．24am±0．2cm，殼高6．65cm±0．6cm，體質(zhì)量54．86g士3．5g)。親貝經(jīng)過(guò)暫養(yǎng)穩(wěn)定后，挑選發(fā)育良好的親貝，解剖獲得精卵[7]。將卵液用100目篩絹濾去較大組織塊后，再用500目篩絹去除組織液和微小雜質(zhì)；精液用300目篩絹過(guò)濾，選用上層，并檢查精子活性。1．2卵母細(xì)胞的促熟室溫(20℃)-F，在幾支15mL試管中加入等量卵液，再加入等量不同濃度
7、的處理液，控制卵密度為500---1000個(gè)／mL，搖勻計(jì)時(shí)。氨海水單獨(dú)處理時(shí)，處理濃度梯度設(shè)定為：0．0025％、0．005％、0．01％、0．015％、0．020％和0．025％(以分析純氨水25％～26％為100％)。處理時(shí)間梯度為：15、30、45和60min。5一羥色胺單獨(dú)處理時(shí)，處理濃度梯度設(shè)定為：0．001、0．002、0．003和0．004mol／L。處理時(shí)間梯度為：15、30、45和60rain。聯(lián)合處理時(shí)，選取前面2組中較好的濃度加以混合，并根據(jù)情況特別添加了先用氨海水浸泡再用5一羥色胺浸泡的處理
8、組(T組)。處理時(shí)間同上。選用在正常海水中浸泡的卵母細(xì)胞作為對(duì)照，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)3個(gè)平行組。1．3人工授精取出處理完畢的卵液，用500目篩絹過(guò)濾，洗去處理液，加入5mL小瓶中，再滴入1～2滴活力旺盛的精子，搖勻。受精過(guò)程中盡量多晃動(dòng)。1．4觀察記錄GVBD發(fā)生率、受精率·基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30771622)；國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2006AAl0A401)資助收稿日期：2010—Ol一22；修訂日期：20lO一03—23作者簡(jiǎn)介：邸煒鵬(1984一)，男，碩士生，主要從事貝類(lèi)遺傳育種研究。E-mail
9、：diweipen905110@163．C0121··通訊作者：E-mail：zpwang(孕OUC．edu．cn醉蚌鵬，等氨海水々5羥乜胺Ⅳ櫛扎痢Ⅲ解剁卵白勺體外促熟作月受精2～3h后．取樣進(jìn)行顯微拍照．照片用于計(jì)算GVBD笈‘l：率、受精率。GVBD發(fā)生率=發(fā)生GVBn的細(xì)胞數(shù)／細(xì)胞總數(shù)×100％；受精率一正常卵裂的細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞總數(shù)×i00
