貝類精子質(zhì)量檢測與評價方法的研究ⅢFDA-PI雙熒光復染法檢測馬氏珠母貝精子的存活率.pdf

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1、第32卷第1期廣東海洋大學學報V01．32No．12012年2月’JournalofGuangdongOceanUniversityFeb．2012貝類精子質(zhì)量檢測與評價方法的研究Ⅲ：FDA．PI雙熒光復染法檢測馬氏珠母貝精子的存活率豆偉，王梅芳，鄭嬌，余祥勇(廣東海洋大學水產(chǎn)學院，廣東湛江524025)摘要：將馬氏珠母貝新鮮精液和精子水浴致死精液配制含有不同精子死亡率(O％、20％、40％、60％、80％)的5濃度梯度檢測樣品．并作為理論精子死1L=率。采用二乙酰熒光素(Fluoresceindiacetate，F(xiàn)DA)．碘化丙啶(Propidiumiodide，PI)雙熒光復染法檢測

2、精子存活率和質(zhì)膜完整性。結(jié)果表明．FDA和PI能有效區(qū)分活精子和死精子，活精子發(fā)出綠色熒光，死精子發(fā)出紅色熒光。各樣品實測精子死亡率和理論死亡率之間呈極顯著正相關，相關系數(shù)r=0．99(p<0．0IoFDA．PI雙熒光復染法檢測馬氏珠母貝精子存活率，靈敏度高．重復性好．準確有效。關鍵詞：馬氏珠母貝；精子；活精率；二乙酰熒光素；碘化丙錠中圖分類號：$968．31+6．1：Q954．43文獻標志碼：A文章編號：1673．9159(2012)01．0059．05SpermsViabilityRateandMembraneIntegrityof鼢lctadumartensiiwithaCombi

3、nationofFDAandPIDOUWei，WANGMei—fang，ZHENG·Jiao，YUXiang—yong(FisheriesCollege，GuangdongOceanUniversity，Zhanjiang524025，China)Abstract：ThespermviabilityrateandspermsmembraneintegritywerestudiedbycombiningFluoresceindiacetate(FDA)withPropidiumiodide(PI)underfluorescencemicroscope．Thespermswerestaine

4、dwithFDAandPI，whichshowedcleardifferencebetweenthedeadandlivesperms：thelivespermsweregreenandthedeadoneswereredunderthefluorescentmicroscopy．Then，thesespermswerekilledat60℃(waterbath)weremixedwithfleshonesSOastoobtainsixrations(fordeadsperms)concentrations(0％，20％，40％60％，80％)．Acorrelationdidexistb

5、etweentheoreticalandpracticalmortalityofsperms(P

6、ia)，珍珠貝目(Pterioida)，珠母貝科(Pteriidae)，珠母貝屬(Pinctbda)．主要分布在廣東、廣西及海南沿海，是一種非常重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖種類，是培養(yǎng)海水珍珠的主要母貝Ill。近年來，對馬氏珠母貝精子的研究收稿日期：基金項目：第一作者：通訊作者：主要集中在精子發(fā)生、超微結(jié)構12】和精子超低溫冷凍[3,41等方面，而對精子質(zhì)量評價的研究甚少。精子膜是精子最外層的細胞結(jié)構。對于細胞內(nèi)外環(huán)境起著生理屏障的作用。質(zhì)膜完整性是保障精子正常新陳代謝，完成獲能和頂體反應等牛理功能的基礎。鑒于精子質(zhì)膜敏感且極易受到損傷15J，因2011．12一19公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(2000

7、03028)；廣東省科技計劃項目(2010803130001I)豆偉(1986--)，女．碩f：研究生．海產(chǎn)經(jīng)濟動物發(fā)育，#物學、余祥勇(1966一)．男．教授．主要從事馳類的遺傳胄i種、生態(tài)養(yǎng)殖技術開發(fā)與管用研究。E-mail：yuxyong@tom．f-ore廣東海洋大學學報第32卷而在人工受精及實驗室的研究中，對精子活率及質(zhì)膜完整性的檢測非常必要。本實驗利用二乙酰熒光素(Fluoresceindiacetate，F(xiàn)DA)．碘化