病毒感染的檢查方法與防治原則-(2).ppt

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1、目的與要求了解病毒的診斷，抗病毒治療，病毒感染的預(yù)防。第一節(jié)病毒感染的檢查方法病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包涵體分離培養(yǎng)一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理2.低溫保存，盡快送檢3.血清學(xué)診斷采雙份血清二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）雞胚接種（egginoculation）動(dòng)物接種（animalinoculation）1.雞胚培養(yǎng)采用孵化9～14天的雞胚絨毛尿囊膜痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊

2、膜腔流感病毒的初次分離卵黃囊嗜神經(jīng)病毒1、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜2.動(dòng)物接種應(yīng)用：尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒病毒的分離培養(yǎng)3.細(xì)胞培養(yǎng)單層細(xì)胞培養(yǎng)（monolayercellculture）分類懸浮細(xì)胞培養(yǎng)（suspendedcellculture）原代細(xì)胞（primarycell）細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞（diploidcell）傳代細(xì)胞系（continuouscellline）病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞1．病毒增殖鑒定(1)細(xì)胞病變效應(yīng)

3、（cytopathiceffect,CPE）①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鑒定①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落麻疹病毒感染細(xì)胞呼吸道合胞病毒感染細(xì)胞②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵體(inclusionbody)(1)細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)腮腺炎病毒感染細(xì)胞(2)紅細(xì)胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)

4、＋紅細(xì)胞表面HA受體(3)干擾現(xiàn)象（interference）風(fēng)疹病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚腎細(xì)胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚腎細(xì)胞風(fēng)疹病毒？?？刹《綜PE(-)—風(fēng)疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—風(fēng)疹病毒(-)?？刹《?+)2.病毒數(shù)量與感染性測(cè)定1.蝕斑形成試驗(yàn)（plaqueformationtest）2.50％組織細(xì)胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見(jiàn)大病毒（痘類病毒），對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大3.病毒血清學(xué)鑒定用已

5、知的抗體，鑒定病毒種、型、亞型(1)血凝抑制試驗(yàn)--—正粘病毒型與亞型鑒定病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集（血凝抑制試驗(yàn)）(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定三、病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測(cè)序四、病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚②目前尚無(wú)分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等1.中和試驗(yàn)（neutralizingtest）病毒＋中和抗體病毒失去感染性特點(diǎn)：特異性高，抗體維持時(shí)間長(zhǎng)應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用五、病

6、毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測(cè)（IgM）病毒的快速診斷光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交SouthernblotPCRNorthernblot第二節(jié)病毒感染的防治原則滅活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重組載體疫苗（recombinantcarriervaccine）亞單位疫苗（subunitvaccine）化學(xué)提取或人工合成疫苗重組疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主動(dòng)免疫常用生物制品